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磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析技術(shù)平臺首次搭建 突破研究瓶頸
2022年12月01日 13:36:41 來源:化工儀器網(wǎng) 作者:宋池 點(diǎn)擊量:4487

近日,廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)生物基因研究中心聯(lián)合加拿大約克大學(xué)、德國馬普分子植物生理研究所的研究團(tuán)隊(duì)首次搭建全自動在線磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)分析技術(shù)平臺,解決了磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)研究的一大瓶頸。

  【化工儀器網(wǎng) 項(xiàng)目成果】近日,廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)生物基因研究中心聯(lián)合加拿大約克大學(xué)、德國馬普分子植物生理研究所的研究團(tuán)隊(duì)在Green Chemistry雜志發(fā)表一項(xiàng)研究成果。該團(tuán)隊(duì)首次搭建全自動在線磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)分析技術(shù)平臺,解決了磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)研究的一大瓶頸。
 
  蛋白質(zhì)的磷酸化修飾是目前已知分布最為廣泛的翻譯后修飾。據(jù)估計(jì),真核生物中有將近1/3的蛋白,能夠在任何時(shí)候被磷酸化。磷酸化修飾在許多生物過程中起著至關(guān)重要的作用,目前已知的作用包括但不限于調(diào)控細(xì)胞膜功能、調(diào)控細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、調(diào)控轉(zhuǎn)錄過程、調(diào)控線粒體功能與能量代謝等。因此,磷蛋白和磷酸化位點(diǎn)的整體表征將有助于我們?nèi)媪私獍麅?nèi)代謝調(diào)控的分子機(jī)制。
 
  液相色譜與串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用 (LC-MS/MS) 由于其高靈敏度和高通量能力,已成為綜合蛋白質(zhì)組表征的強(qiáng)大工具。然而,由于磷酸肽豐度低、電離效率低以及非磷酸肽的信號抑制,通過 LC-MS/MS 直接表征全細(xì)胞消化物中的磷酸肽通常是不切實(shí)際的。因此,在當(dāng)前的磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)中,質(zhì)譜 (MS) 分析之前的靶向富集是必不可少的。
 
  目前,已經(jīng)開發(fā)了多種用于磷酸肽富集的材料,但這些通常涉及復(fù)雜的制造過程和高化學(xué)品消耗。此外,磷酸肽的富集是離線的,需要多個手動步驟,從而使其成為一個繁瑣的工作流程,有機(jī)溶劑和塑料耗材的消耗量很大。隨著磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)向大規(guī)模任務(wù)的發(fā)展,迫切需要開發(fā)一種分析性能優(yōu)異的策略,同時(shí)滿足低試劑和耗材消耗的要求。
 
  為解決這一問題,研究團(tuán)隊(duì)合成了一種新型的可重復(fù)使用的磷酸化捕獲柱,用于在線富集磷酸肽,并進(jìn)一步將其與商業(yè)nanoLC-MS/MS系統(tǒng)集成,建立了一個低成本、低浪費(fèi)的自動化在線分析平臺。在軟件控制下,該平臺可自動連續(xù)富集和分析一批生物樣品中的磷酸肽,無需操作員干預(yù)。
 
  它不僅獲得了高磷酸位點(diǎn)覆蓋率和重現(xiàn)性的結(jié)果,而且在表征具有不同磷酸化狀態(tài)的肽方面表現(xiàn)出色,從而促進(jìn)了新磷酸位點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)。更重要的是,可重復(fù)使用的pho-trap柱和納流裝置中的在線富集極大地有助于減少耗材、溶劑的消耗并節(jié)省磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的勞動力。
 
  研究人員表示,隨著磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)向大規(guī)模研究的發(fā)展和低碳經(jīng)濟(jì)的到來,這種用于磷酸化蛋白質(zhì)組分析的自動化在線平臺有望在未來推動蛋白質(zhì)磷酸化的研究。
 
  (資料來源:中國科學(xué)報(bào) )
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