干粉細(xì)胞培養(yǎng)基的配制方式及注意事項(xiàng)
在干細(xì)胞培養(yǎng)基配制過(guò)程中,不同的培養(yǎng)基其溶解性可能有一定的差別,培養(yǎng)基配制過(guò)程中血清、碳酸氫鈉及抗生素等的添加時(shí)間和用量、pH和滲透壓的測(cè)定及酸堿度是否需要調(diào)節(jié)等,都可能影響zui終細(xì)胞培養(yǎng)基性能的發(fā)揮。
(1)配制常規(guī)過(guò)濾除菌粉末細(xì)胞培養(yǎng)基
1) 配制用水:通常選擇制備的超純水器過(guò)濾出的去熱原(細(xì)菌內(nèi)毒素<0.25EU/m)培養(yǎng)基用水(TOC< 10μg/L或者是10mg/L,電阻率:18.2MΩ(25℃))。現(xiàn)用現(xiàn)制備,隔夜儲(chǔ)存用水(非無(wú)菌)的細(xì)菌內(nèi)毒素及電導(dǎo)率等升高,影響細(xì)胞的增殖和產(chǎn)品的質(zhì)量;
2) 培養(yǎng)基粉劑的稱量:小量采用天平稱量,要求準(zhǔn)確;大量采用市售大包裝,配制時(shí)可以根據(jù)說(shuō)明;
3) 干細(xì)胞粉劑溶解:溶解充分,觀察有無(wú)顆粒,顏色改變情況等;
4) 過(guò)濾前約半個(gè)小時(shí)(根據(jù)配制量可調(diào))按使用說(shuō)明添加NaHCO3,充分溶解;
5) 測(cè)定pH,根據(jù)需要用1mol / L 氫氧化鈉溶液或 1mol /L鹽酸溶液來(lái)調(diào)節(jié)pH。過(guò)濾后的pH將會(huì)有所增長(zhǎng);
6) 定容,檢測(cè)滲透壓;
7) 盡快過(guò)濾、分裝,封好瓶口,避免漏氣,2~8℃保存;
8) 采用一次性濾器時(shí)濾后檢查濾膜,有無(wú)漏、裂、是否很臟或是有未溶解物;采用不銹鋼濾器(內(nèi)置可反復(fù)用的除菌濾芯)需進(jìn)行濾器的完成性檢測(cè);
9) 過(guò)濾前、中、后三段采樣進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè),同時(shí),留取樣品置于37℃培養(yǎng),至該批培養(yǎng)基用完;
10) 完整記錄整個(gè)過(guò)程每一個(gè)步驟,便于追溯。
(2)配制可高壓滅菌粉末細(xì)胞培養(yǎng)基
1) 其配制用水及配制粉劑的稱取、及配制程序基本同過(guò)濾型培養(yǎng)基配制方法。溶解后高壓,通常在121℃、15psi下滅菌15分鐘。
2) 待細(xì)胞培養(yǎng)液冷卻至室溫,按一定比例加入無(wú)菌的谷氨酰胺溶液、無(wú)菌7.5%(w/v)碳酸氫鈉溶液,加注射用水(水溫20℃~30℃)至規(guī)定體積,混勻。
3) 如果必要,用1mol / L 氫氧化鈉溶液或 1mol /L鹽酸溶液調(diào)pH至所需值。
4) 干細(xì)胞溶液應(yīng)在2℃-8℃下避光保存。
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