干細(xì)胞原理:
轉(zhuǎn)化(Transformation ):將外源DNA 分子引入受體細(xì)菌,使之獲得新的遺傳性狀。
受體細(xì)菌一般是限制修飾系統(tǒng)缺陷的變異株,不含限制性內(nèi)切酶 和甲基化酶的突變體(R-,M-),可以容忍外源DNA 分子進(jìn)入體內(nèi)并穩(wěn)定地遺傳給后代。受體細(xì)胞經(jīng)過一些特殊方法,如電擊或CaCl2 、RbCl/KCl等化學(xué)試劑的處理后,細(xì)胞膜的通透性增高,成為感受態(tài)細(xì)胞(Compenent cells),使外源DNA 分子得以進(jìn)入。
目前常用的感受態(tài)細(xì)胞制備方法有CaCl2 和RbCl/KCl法,RbCl/KCl法制備的感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率較高,但CaCl2 法簡便易行,且其轉(zhuǎn)化效率*可以滿足一般實驗的要求,制備出的感受態(tài)細(xì)胞暫時不用時,可加入無菌甘油至總體積15%,于-70℃保存半年之久,因此CaCl2 法為使用更廣泛。
準(zhǔn)備:
1、配制0.05mol/L CaCl2 -15%甘油混合溶液,高溫高壓滅菌;
注: CaCl2 必須為分析純以上。
2、實驗中所需的所有試管 、培養(yǎng)瓶 、離心管 等均要用去離子水*清洗干凈,高溫高壓滅菌;
注: 有制備感受態(tài)細(xì)菌的一套實驗器材。
3、受體菌的培養(yǎng):干細(xì)胞從非選擇性LB平板上挑取E.coli單菌落,接種于3-5ml LB液體培養(yǎng)基中,37℃振蕩培養(yǎng)過夜至對數(shù)生長中后期。將該菌懸液以1:100的比例接種于50~100ml LB液體培養(yǎng)基中,37℃振蕩培養(yǎng)2.5小時至OD600 =0.5。注:培養(yǎng)時間不宜超過2.5小時,否則不能達(dá)到轉(zhuǎn)化效率。
產(chǎn)品名稱: Anti-Cdc2/P34CDC2/CDK1 規(guī)格: 0.1ml 周期素依賴激酶1抗體
產(chǎn)品名稱: Anti-Cdc34 規(guī)格: 0.1ml 細(xì)胞周期調(diào)控因子34
產(chǎn)品名稱: Anti-Cdc6 規(guī)格: 0.1ml 細(xì)胞分裂周期蛋白6抗體
產(chǎn)品名稱: Anti-CDK1 規(guī)格: 0.1ml 周期素依賴性激酶1抗體
產(chǎn)品名稱: Anti-CDK2 規(guī)格: 0.1ml 周期素依賴性激酶2抗體
產(chǎn)品名稱: Anti-CDK3 規(guī)格: 0.1ml 周期素依賴性激酶3抗體
產(chǎn)品名稱: Anti-CDK4 規(guī)格: 0.1ml 周期素依賴性激酶4抗體
產(chǎn)品名稱: Anti-CDK5 規(guī)格: 1ml 周期素依賴性激酶5抗體
產(chǎn)品名稱: Anti-CDK6 規(guī)格: 0.2ml 周期素依賴性激酶6抗體
干細(xì)胞
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。