干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法原理
HL-60細(xì)胞是一種急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞，在體外無需加刺激因子，可在軟瓊脂培養(yǎng)基中形成集落。二甲基亞砜是一種細(xì)胞分化誘導(dǎo)劑，經(jīng)二甲基亞砜處理后的HL-60細(xì)胞按粒系途徑定向成熟分化，同時(shí)細(xì)胞的增殖力降低，幾乎全部細(xì)胞喪失了軟瓊脂中形成集落的能力。因此，這種方法可用于細(xì)胞分化的基礎(chǔ)研究和臨床腫瘤治療的療效檢驗(yàn)等方面。
實(shí)驗(yàn)材料
HL-60細(xì)胞 
試劑、試劑盒
小牛血清 RPMI1640培養(yǎng)液 臺(tái)盼蘭 瓊脂 二甲基亞砜 
儀器、耗材
超凈工作臺(tái) 二氧化碳培養(yǎng)箱 顯微鏡 培養(yǎng)瓶 吸管 酒精燈 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板 多孔培養(yǎng)板 
實(shí)驗(yàn)步驟
1.  收集對(duì)數(shù)生長期的HL-60細(xì)胞，先按實(shí)驗(yàn)十三測(cè)定細(xì)胞活力，然后調(diào)整細(xì)胞濃度，制成300~1 000活細(xì)胞/ml 的細(xì)胞懸液。

2.  取二個(gè)培養(yǎng)瓶每個(gè)瓶中加9 ml 調(diào)整好濃度的細(xì)胞懸液，然后各加入1 ml 3%瓊脂（已融化，在65℃水浴中放置），迅速加入，混勻。

3.  用微量加樣器吸140 μl 二甲基亞砜（MDSO），加到一個(gè)瓶中，充分混勻，為實(shí)驗(yàn)組，另一瓶不加DMSO，為空白對(duì)照組。

4.  取一個(gè)16 mm 多孔培養(yǎng)板，每孔加1 ml（35 mm 培養(yǎng)皿需加2 ml）細(xì)胞瓊脂懸液，勿有氣泡，將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分兩組加好，蓋上蓋并作好標(biāo)記。

5.  在室溫放置20分鐘使細(xì)胞瓊脂懸液凝固。
 
6.  然后移培養(yǎng)板或平皿于CO2培養(yǎng)箱中37℃進(jìn)行培養(yǎng)。

7.  培養(yǎng)7~10天，肉眼觀察并計(jì)數(shù)細(xì)胞集落。

8.  結(jié)果：以肉眼可見的細(xì)胞團(tuán)（含500個(gè)以上細(xì)胞）作為計(jì)數(shù)集落的標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)照組HL-60細(xì)胞在含0.3%的軟瓊脂培養(yǎng)基中生長良好，每個(gè)孔中可見有多個(gè)集落形成，而實(shí)驗(yàn)組HL-60細(xì)胞因經(jīng)二甲基亞砜誘導(dǎo)分化，細(xì)胞在軟瓊脂中的集落形成明顯減少。

9.  干細(xì)胞集落的計(jì)數(shù)和計(jì)算：

（1）集落數(shù)=n孔中細(xì)胞集落數(shù)總和/n孔

（2）集落形成率=集落數(shù)/接種培養(yǎng)細(xì)胞總數(shù)×100%
Cladribine Related Compound A    克拉曲濱相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品    24757-70-8    20mg
    西替利嗪相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品    246870-46-2    20mg
Doxazosin Related Compound C    多沙唑嗪相關(guān)雜質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品    23680-84-4    20mg
    依法韋侖相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品    209414-27-7    20mg
    左沙丁胺醇鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品    18910-68-4     20mg
Abacavir Sulfate Racemic    外消旋阿巴卡韋標(biāo)準(zhǔn)品    188062-50-2    20mg
Actein    黃肉楠堿標(biāo)準(zhǔn)品    18642-44-9    20mg
    左沙丁胺醇鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)G標(biāo)準(zhǔn)品    182676-90-0     20mg
    外消旋依法韋侖標(biāo)準(zhǔn)品    177530-93-7    20mg
Dofetilide Related Compound A    多非利特相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品    176447-94-2    20mg
干細(xì)胞