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液相色譜是以經(jīng)典的液相色譜為基礎(chǔ),它是以高壓下的液體為流動(dòng)相的色譜過(guò)程。它所用的固定向粒度小(5-10um),有傳質(zhì)快、柱效高等特點(diǎn)。液相色譜法(HPLC)是60年代后期發(fā)展起來(lái)的一種分析方法。
輸液泵/高壓泵是保證HPLC系統(tǒng)流路暢通、流量和壓力穩(wěn)定的重要儀器部件。目前多用往復(fù)式恒流柱塞泵。主要由柱塞桿、密封墊圈和兩個(gè)單項(xiàng)閥組成,用馬達(dá)帶動(dòng)凸輪驅(qū)動(dòng)柱塞桿作吸液和排液的往復(fù)運(yùn)動(dòng)。常見(jiàn)泵的故障主要有以下幾種,并提供解決的辦法。
1、單向閥故障
由于球與閥座密封不嚴(yán),導(dǎo)致液體倒流,造成壓力不穩(wěn),甚至球與閥座粘在一起阻死。為避免單項(xiàng)閥中的寶石球和閥座被污染,流動(dòng)相應(yīng)使用HPLC級(jí)的溶劑,并且配好的流動(dòng)相一定要用0.45um濾膜過(guò)濾和脫氣。如果泵被微粒污染,可分別用25ml水 25ml甲醇 25ml異丙醇 25ml二氯甲烷依次沖洗,zui后再用所用的溶液沖洗整個(gè)系統(tǒng)。注意:沖洗時(shí)應(yīng)打開(kāi)泄液閥。如果氣泡進(jìn)入閥中,它會(huì)緊貼在閥體的一側(cè),使寶石球難返回到閥座,引起液體倒流,導(dǎo)致泵的壓力和流速明顯改變。此時(shí)應(yīng)立即打開(kāi)瀉液閥,大流量(2ml/min)沖洗泵,直至排除液為直線型。如果泵進(jìn)氣泡也可在泵頭上排氣泡,具體做法為:用扳手固定住進(jìn)氣泡的泵頭,擰開(kāi)輸出管道的壓帽,手動(dòng)泵進(jìn)液,這時(shí)可見(jiàn)到氣泡從孔中擠壓出來(lái),直至無(wú)氣泡排出將壓帽擰緊。如果采取上述方法仍不能使壓力穩(wěn)定,應(yīng)考慮是密封墊圈壞了?或單向閥磨損、球不光滑等,需更換部件。
2、泵墊圈故障
泵墊圈常見(jiàn)的故障是滲漏和墊圈受損污染系統(tǒng).液相色譜系統(tǒng)一般情況下不要使用強(qiáng)酸強(qiáng)堿溶液,樣品PH值一般調(diào)到中性,才可進(jìn)樣。如果強(qiáng)酸強(qiáng)堿會(huì)損壞密封墊和柱塞桿。密封圈與運(yùn)動(dòng)著的柱塞桿緊密接觸,可使柱塞在泵頭自由運(yùn)動(dòng)而流動(dòng)相不漏出來(lái),它是液相色譜中zui易磨損的部件。有條件的實(shí)驗(yàn)室可三個(gè)月更換一次墊圈,以防止泵系統(tǒng)污染。如果用緩沖鹽作流動(dòng)相則更會(huì)加速墊圈的磨損,應(yīng)及時(shí)沖洗。墊圈損壞一般表現(xiàn)為:泵壓力不穩(wěn)、泵頭漏液。為避免上述故障的發(fā)生,我們?cè)诜治鲋袘?yīng)注意以下幾點(diǎn):
①使用超純水、純度級(jí)別較高的試劑和色譜級(jí)溶劑配制流動(dòng)相;
?、谂浜玫牧鲃?dòng)相一定要抽濾脫氣,即便儀器有在線脫氣裝置,也在上機(jī)前進(jìn)行抽濾;
?、郾迷趩?dòng)前一定要通過(guò)泄液閥抽凈泵里的空氣;
?、苡镁彌_鹽洗脫時(shí),分析結(jié)束后一定要用水沖洗泵和整個(gè)流路系統(tǒng),zui后用有機(jī)溶劑充滿系統(tǒng)。
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