在實際操作中，凍存轉(zhuǎn)化細胞要進行復(fù)蘇，再培養(yǎng)傳代。復(fù)蘇細胞一般采用快速融化法。以保證細胞外結(jié)晶快速融化，以避免慢速融化水分滲入細胞內(nèi)，再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細胞。 

一、凍存細胞復(fù)蘇的操作步驟

（1）佩戴眼鏡和手套，從液氮罐中取出安瓿或冷凍管。

（2）迅速放入 38℃水浴中，并不時搖動，在 1 分鐘內(nèi)使其*融化，然后在無菌下取出細胞。

（3）在 1000r/min速度下離心 5～10 分鐘，棄去上層液，加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中，接種濃度 1×109/L，置 37℃溫箱靜置培養(yǎng)，次日 更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，觀察生長情況。若細胞密度較高，及時傳代?；驘o需離心直接將細胞加入瓶中，并加入培養(yǎng)基貼壁培養(yǎng) 12～24 小時 后，充去上清，換入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

 二、凍存細胞復(fù)蘇的注意事項

（1）從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養(yǎng)細胞都可以用于凍存，但為對數(shù)生長期細胞。在凍存前一天換一次培養(yǎng)液；

（2）將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護工作，以免凍傷；

（3）轉(zhuǎn)化細胞凍存和復(fù)蘇用新配制的培養(yǎng)液。

人前列腺平滑肌細胞*培養(yǎng)基 100mL

人前列腺成纖維細胞*培養(yǎng)基 100mL

人甲狀腺濾泡上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL

人胰腺星狀細胞*培養(yǎng)基 100mL

人胰腺上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL

人淋巴內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基 100mL

人淋巴成纖維細胞*培養(yǎng)基 100mL

人淋巴血管內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基 100mL

人臍帶單核細胞*培養(yǎng)基 100mL

人外周血白細胞*培養(yǎng)基 100mL

人食管上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL

人食管平滑肌細胞*培養(yǎng)基 100mL
轉(zhuǎn)化細胞