摘要：GPC凝膠凈化色譜和SPE固相萃取是目前在食品安全檢測實驗室常用的樣品前處理方式。在線GPC可以實現(xiàn)GPC凈化的在線完成，對乳制品中三聚氰胺的分析中能夠進(jìn)行較好的去除基質(zhì)，使衍生化進(jìn)行得更加*，檢測限可以達(dá)到0.01mg/kg。
關(guān)鍵詞　凝膠凈化色譜；島津氣質(zhì)聯(lián)用儀；三聚氰胺；前處理

1、實驗部分
儀器條件和參數(shù)
島津在線前處理聯(lián)機(jī)系統(tǒng)GPC-GCMS
1.1 GPC條件：
流動相：丙酮+環(huán)己烷＝3+7，流量0.1mL/min。進(jìn)樣量20uL。
1.2 GCMS條件：
色譜柱：DB-5ms （30m×250um×0.25um）；
柱溫：90℃，5min；15℃/min；190，0min；30℃/min；290，0min。
PTV進(jìn)樣口：120℃，5min；80℃/min；280，8min。5min后關(guān)閉分流閥。
質(zhì)譜條件：scan模式，掃描范圍m/z 86～400。SIM模式：m/z 342、327、328、171，定量離子m/z 342。
色質(zhì)譜圖見圖2～6。

2、前處理方法
　　提取凈化方法參照NY/T 1372-2007。
　　取樣1～5g，按比例加入10倍量的二乙胺/水/乙腈=10/40/50(體積比)提取溶劑，混勻超聲提取，取約1.5mL混合液，10000rmp離心5min，準(zhǔn)確吸取1mL上清液過MCX（Waters，3cc，60mg）柱，依次用3mL水和3mL甲醇洗滌固相萃取柱，后用3mL 5％氨化甲醇洗脫，洗脫液于70℃氮氣吹干。按法衍生化，后用氮氣吹干衍生試劑，加入1mL流動相（GPC）后GPC-GCMS測定，進(jìn)樣20uL。
　　如圖1，三聚氰胺TMS（3TMS）衍生物的GPC保留時間為3.29min（4min為溶劑峰），按儀器說明書編制GPC-GCMS的GPC部分和GCMS部分的條件。

3、結(jié)果與討論
3.1 GPC在線前處理方法的優(yōu)勢
　　按NY/T 1372-2007（GC-MS法檢出限0.05mg/kg），取5g樣品，50mL提取液，后取10mL（相當(dāng)于1g樣品）提取液過陽離子交換柱凈化，很容易造成凈化柱堵住，且取10mL過柱后由于雜質(zhì)較多，衍生化的重現(xiàn)性很難做。本法只取1mL（相當(dāng)于0.1g樣品）提取液過陽離子交換柱，液體流過很通暢，后凈化效果與10mL樣品過柱比要好得多。
　　本方法檢出限為0.05mg/kg（相當(dāng)于0.1g樣品）。因為凈化效果較好，衍生后的定容體積可以到0.2mL，檢測限可以到0.01mg/kg（相當(dāng)于0.1g樣品）。
3.2 提取液的選擇
　　同時測試了美國FDA用于測定寵物飼料的方法，用甲醇提取奶粉中的三聚氰胺，回收率很低（小于10％），且提取液中糖的含量較高，影響后三聚氰胺的衍生化產(chǎn)率。用其它有機(jī)溶劑提取的方法都存在糖對衍生化的干擾，后都要用陽離子交換的方法去除。

圖1 標(biāo)樣和樣品的GPC圖

圖2 40ng/mL三聚氰胺－3TMS（13.9min）標(biāo)樣SCAN模式下提取離子色譜圖和質(zhì)譜圖


圖3 100ng/mL三聚氰胺－3TMS標(biāo)樣（13.9min）SIM模式下提取離子色譜圖和質(zhì)譜圖


圖4 陰性樣品提取離子色譜圖（13.9min）


圖5 上述樣品加標(biāo)2mg/kg的提取離子色譜圖（回收率92％）


圖6 某奶粉樣品提取離子色譜圖（20mg/kg）
 

4、小結(jié)
　　本文使用了在線前處理聯(lián)機(jī)系統(tǒng)GPC-GCMS在奶制品中三聚氰胺的檢測中，不但減少了樣品分析的取樣量，減少前處理時溶劑的使用量，使樣品快速通過前處理柱，更好地去除干擾基質(zhì)，使樣品中目標(biāo)化合物衍生化時更迅速、*，檢測的靈敏度更高，回收率結(jié)果滿意，檢測限可達(dá)到0.01mg/kg，滿足各行業(yè)實驗室對乳制品中三聚氰胺的分析檢測要求。