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細胞凍存失敗的原因,你知道嗎?

來源:重慶市華雅干細胞技術有限公司   2020年08月31日 13:43  

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細胞凍存是細胞培養(yǎng)的關鍵步驟。細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外,減少細胞內冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。
隨著細胞被冷凍至冰點以下,懸液中冰晶和溶質的濃度有所增加。如果冷卻過程中,胞內水分可以滲出細胞,則可以減少胞內冰晶。通常1℃/min的降溫速度可以促進此過程。但是,水分的喪失會導致細胞收縮,當這種收縮達到一定程度,又會導致細胞活性的劇烈下降。冷凍保護劑,如甘油或者二甲基亞砜(DMSO),可以緩解這種效應。細胞凍存的標準程序是在含有冷凍保護劑的培養(yǎng)基中,將細胞緩慢冷凍至–70℃,然后將凍存管轉移到液氮中以保持低于–130℃的環(huán)境。

5%-10%的甘油和DMSO是凍存保護劑。雖然DMSO對細胞有毒性,但是與甘油相比,其滲入細胞的速度更快,而且凍存重復性更好(而且細胞復蘇效率更好)。右旋糖酐系蔗糖是經腸膜狀明串珠菌-1226(Leuconostoc mesenteroides)發(fā)酵合成的一種高分子葡萄糖聚合物,右旋糖酐-40(Dextran-40)別稱低分子右旋糖酐,右旋糖酐40的重均分子量(Mw)應為32000~42000。右旋糖酐-40可以維持滲透壓和 PiH , 提供適宜細胞存活的介質環(huán)境。
OriGen生物醫(yī)學公司成立于1997年,是一家總部總部位于德克薩斯州*。OriGen 為細胞培養(yǎng)和冷凍保存提供關鍵性的器材。制造的產品非常適用于組織存儲,細胞培養(yǎng)/存儲,干細胞擴增和長期冷凍保存,并且特別適合于液氮冷凍保存。



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55%二甲基亞砜,5%右旋糖酐40混合液



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  • ORIGEN USP級 DMSO通過CE、USP、EP認證,且有CDE受理號


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