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轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)你還在傻傻分不清?

來源:安諾倫(北京)生物科技有限公司   2021年08月26日 17:30  

一、什么是轉(zhuǎn)染?

轉(zhuǎn)染(transfection)是真核細(xì)胞主動或被動導(dǎo)入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。

常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類,一類是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(永jiu轉(zhuǎn)染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細(xì)胞中可存在多個拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達(dá),但通常只持續(xù)幾天,多用于啟動子和其它調(diào)控元件的分析。一般來說,超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高,在轉(zhuǎn)染后24-72小時(shí)內(nèi)(依賴于各種不同的構(gòu)建)分析結(jié)果,常常用到一些報(bào)告系統(tǒng)如熒光蛋白,β半乳糖苷酶等來幫助檢測。后者也稱穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,外源DNA既可以整合到宿主染色體中,也可能作為一種游離體(episome)存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小,大約1/104轉(zhuǎn)染細(xì)胞能整合,通常需要通過一些選擇性標(biāo)記,如來氨丙基轉(zhuǎn)移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反復(fù)篩選,得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細(xì)胞系。
轉(zhuǎn)染技術(shù)的選擇對轉(zhuǎn)染結(jié)果影響也很大,許多轉(zhuǎn)染方法需要優(yōu)化DNA與轉(zhuǎn)染試劑比例,細(xì)胞數(shù)量,培養(yǎng)及檢測時(shí)間等。


2、轉(zhuǎn)化

轉(zhuǎn)化(transformation)是某一基因型的細(xì)胞從周圍介質(zhì)中吸收來自另一基因型的細(xì)胞的DNA而使它的基因型和表現(xiàn)型發(fā)生相應(yīng)變化的現(xiàn)象。
該現(xiàn)象首先發(fā)現(xiàn)于細(xì)菌。也是細(xì)菌間遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移的多種形式中最早發(fā)現(xiàn)的一種,它不同于通過噬菌體感染傳遞遺傳物質(zhì)的轉(zhuǎn)導(dǎo)以及通過細(xì)菌細(xì)胞的接觸而轉(zhuǎn)移DNA的細(xì)菌接合。


3、轉(zhuǎn)導(dǎo)

轉(zhuǎn)導(dǎo)(transduction)由噬菌體將一個細(xì)胞的基因傳遞給另一細(xì)胞的過程。它是細(xì)菌之間傳遞遺傳物質(zhì)的方式之一。其具體含義是指一個細(xì)胞的DNA或RNA通過病毒載體的感染轉(zhuǎn)移到另一個細(xì)胞中。

 

轉(zhuǎn)染 轉(zhuǎn)化 轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)別:

1、作用不同

轉(zhuǎn)化是某一基因型的細(xì)胞從周圍介質(zhì)中吸收來自另一基因型的細(xì)胞的DNA而使它的基因型和表現(xiàn)型發(fā)生相應(yīng)變化的現(xiàn)象。

轉(zhuǎn)導(dǎo)由噬菌體將一個細(xì)胞的基因傳遞給另一細(xì)胞的過程。

轉(zhuǎn)染是真核細(xì)胞主動或被動導(dǎo)入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。

2、特點(diǎn)不同

轉(zhuǎn)化是細(xì)菌間遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移的多種形式中最早發(fā)現(xiàn)的一種,它不同于通過噬菌體感染傳遞遺傳物質(zhì)的轉(zhuǎn)導(dǎo)以及通過細(xì)菌細(xì)胞的接觸而轉(zhuǎn)移DNA的細(xì)菌接合。

轉(zhuǎn)導(dǎo)是細(xì)菌之間傳遞遺傳物質(zhì)的方式之一。其具體含義是指一個細(xì)胞的DNA或RNA通過病毒載體的感染轉(zhuǎn)移到另一個細(xì)胞中。

轉(zhuǎn)染關(guān)鍵因素都是用氯化鈣處理大腸桿菌細(xì)胞,以提高細(xì)胞膜的通透性,從而使外源DNA分子能夠容易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部。

3、功能不同

轉(zhuǎn)化的研究不但在理論上有重要意義,而且在基因工程中是將質(zhì)粒或病毒載體引入宿主細(xì)胞的一種重要手段。它也可能為育種和遺傳性疾病的基因治療提供新的途徑。

應(yīng)用轉(zhuǎn)導(dǎo)是細(xì)菌的遺傳學(xué)研究中的一種常用研究手段。它可以用來在細(xì)菌間轉(zhuǎn)移基因,進(jìn)行互補(bǔ)測驗(yàn),進(jìn)行基因定位,特別是通過共轉(zhuǎn)導(dǎo)方法進(jìn)行基因的精細(xì)結(jié)構(gòu)分析。

轉(zhuǎn)染技術(shù)的選擇對轉(zhuǎn)染結(jié)果影響也很大,許多轉(zhuǎn)染方法需要優(yōu)化DNA與轉(zhuǎn)染試劑比例,細(xì)胞數(shù)量,培養(yǎng)及檢測時(shí)間等。




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