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通蔚給您講解細胞培養(yǎng)三大步驟,科研人必看!

來源:通蔚試劑(上海)有限公司   2023年12月12日 09:28  

冬的精靈跖起腳尖,掠過樹頂,染紅幾片葉子,然后又乘著一簇飛掠過山谷離開。初冬的愁,結在了愈來愈孤立的寒枝上,化作片片飄零的紅葉,融在了冬蟲漸唱漸衰的悲鳴中。

通蔚給您講解細胞培養(yǎng)三大步驟:

一、復蘇

細胞復蘇的原則: 快速融化

必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃,使細胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶,對細胞造成損害。

實驗前準備

將水浴鍋提前預熱至37℃。

細胞實驗室進行常規(guī)消毒,用75%酒精擦拭紫外線照射40min的超凈工作臺臺面,保證無菌。

在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等即將使用的耗材及試劑。

取出凍存管

根據(jù)細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的對應編號。

從液氮罐中取出細胞盒,取出所需的細胞,同時核對管外的編號。

迅速解凍

迅速將凍存管投入到已經(jīng)預熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動,使管中的液體迅速融化。

約1-2min后凍存管內(nèi)液體wan全溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺內(nèi)。

細胞

二、傳代

1.傳代密度過高

一旦細胞養(yǎng)太久至融合度過高(>90%)才傳代,容易使細胞產(chǎn)生老化現(xiàn)象,甚至是堆疊,再消化細胞時不易吹打成單顆細胞,即便再重新鋪盤傳代,細胞也無法回到原本的特性了。(如:單層細胞,沒長滿就發(fā)生堆疊現(xiàn)象)。

解決方案

盡量避免融合度過高,鏡下觀察融合度約達到80%即可傳代分盤。

細胞融合度:在細胞培養(yǎng)中指的是細胞在培養(yǎng)表面(培養(yǎng)皿/瓶)所占的比例。

2.傳代密度過低

哺乳動物貼壁培養(yǎng)細胞,若細胞培養(yǎng)到 80-90%密度需要開始傳代,在傳代接種細胞密度過低,細胞間距離太遠,就無法在細胞間產(chǎn)生黏附及通信作用,幫助信號傳導并活化細胞;總體細胞量不足,分泌的生長因子濃度會不足以產(chǎn)生利于生長的微環(huán)境,以上皆會造成增殖速度遲緩或細胞死亡。

解決方案

細胞傳代時,要進行準確的細胞計數(shù),確保鋪盤的密度。

三、凍 存

細胞凍存的基本原理: 慢凍

手動降溫:將細胞依序放在4℃(30分鐘)、-20℃(1小時)、-80℃(過夜)后移至液氮中保存。

程序降溫盒:是一般最guang泛使用的降溫法,為一種特制冷凍容器(填充異丙醇或依靠特制金屬導熱),使細胞以每分鐘約-1℃的速度降至-80℃(過夜),然后移至液氮中保存。

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