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HPLC 液相色譜柱如何選購?

來源:深圳市恒譜生科學儀器有限公司   2025年06月25日 15:42  
 
  1. 考慮分析物的性質
    • 化學結構:極性強的化合物在反相色譜柱上保留弱,含芳香環(huán)的化合物,使用苯基 / 苯乙基固定相可能效果更好。
    • 穩(wěn)定性:了解分析物對 pH、溫度的敏感程度,避免選擇在不適宜條件下不穩(wěn)定的色譜柱。
    • 分子量范圍:小分子通常使用 80-120Å 孔徑的色譜柱;多肽適合 120-200Å 孔徑;蛋白質等大分子則需要≥300Å 孔徑的色譜柱。
  2. 選擇固定相
    • 鍵合相類型:反相色譜中,C18 柱通用性強;C8 柱疏水性稍弱;苯基 / 苯乙基柱對含芳香環(huán)化合物有獨特選擇性。正相色譜適用于極性化合物和異構體分離。親水作用色譜用于強極性、親水性化合物。離子交換色譜適用于帶電荷化合物。尺寸排阻色譜依據(jù)分子大小分離,常用于測定蛋白質、聚合物的分子量分布。
    • 鍵合相密度:高密度覆蓋的鍵合相可減少硅醇基效應,使分析結果更穩(wěn)定。
    • 封端:封端處理可減少殘余硅醇基與堿性化合物的次級相互作用,改善峰形。
  3. 確定色譜柱尺寸
    • 柱長:較長的色譜柱分離度更高,但分析時間長、柱壓高;短柱則相反??焖俜治龀S?50-100mm 的短柱;復雜樣品分離用 150-250mm 的長柱。
    • 內徑:4.6mm 內徑的色譜柱通用性好;1.0mm 或更小內徑的微徑柱常用于質譜聯(lián)用;內徑大于 4.6mm 的半制備 / 制備柱適用于樣品制備分離。
  4. 考慮硅膠基質
    • 純度:高純度硅膠金屬雜質含量低,能有效改善峰形和穩(wěn)定性;低純度硅膠成本低,但可能影響結果準確性和重復性。
    • pH 耐受范圍:常規(guī)硅膠柱在 pH2-8 范圍內使用,雜化顆粒技術柱 pH 耐受范圍可拓寬至 1-12。
    • 溫度耐受性:常規(guī)硅膠柱通常耐受溫度低于 60°C,雜化顆?;蛱厥怄I合柱可耐受更高溫度。
  5. 其他因素
    • 流動相條件:確保色譜柱能耐受流動相的 pH,且流動相中的緩沖鹽、添加劑與固定相兼容。
    • 儀器系統(tǒng):根據(jù)儀器的耐壓能力選擇合適的色譜柱,UHPLC 柱需要超高壓系統(tǒng),常規(guī) HPLC 柱在普通 HPLC 系統(tǒng)上即可使用。
    • 應用要求:根據(jù)分離度、分析速度、靈敏度、穩(wěn)定性等應用要求選擇色譜柱。同時,也要考慮成本因素,在性能和預算之間找到平衡。

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