蛋白質組學(Proteomics)是后基因組時代的重要研究領域,旨在全面研究生物體內所有蛋白質的表達、結構、功能、修飾及其相互作用。它不僅是基因組學的補充,更是理解生命活動分子機制的核心手段,它是一種基于質譜檢測的分析技術。
該方法的大致過程是將從樣本中提取到的蛋白水解/酶解為肽段,然后進行質譜檢測,根據(jù)肽段的鑒定和定量信息推測出其對應蛋白的鑒定和定量結果。因此,目前的蛋白質組學樣品制備流程,通常均會包括蛋白提取、蛋白酶解和肽段除鹽三個步驟。
一、蛋白提取
蛋白質提取旨在從含多種干擾物的生物樣本中釋放并純化蛋白質。通過裂解液(含SDS、尿素等去垢劑)破壞樣本結構,結合超聲/研磨促進蛋白溶解。針對雜質或SDS干擾,可采用沉淀/復溶等方法純化。血漿需去除高豐度蛋白以提高檢測靈敏度。提取方法需適配后續(xù)分析需求。
二、蛋白酶解
蛋白質是一類含有空間結構的高分子化合物,在酶解前需要提前加入還原劑提高酶解效率。蛋白質組學中常用胰蛋白酶進行酶解處理,將蛋白酶解為適宜質譜檢測的肽段長度。
三、肽段除鹽
蛋白樣本前處理通常是在含鹽緩沖體系中進行,目前常使用層析法,主要原理是SDB或C18材質的層析柱可以結合待檢測肽段,從而達到分離和純化肽段的目的。脫鹽后的肽段通過真空離心濃縮儀抽干后,即可于4℃或-20℃短期保存,等待后續(xù)的質譜檢測。
如何建立一個高效的樣品制備流程?
在蛋白提取和酶解階段,越來越多的公司采用一體式自動化前處理儀器。如北京青蓮百奧生物有限公司生產(chǎn)的前處理機器人,可同時處理1-96個樣本。酶解后的樣品放入離心濃縮儀干燥后進質譜檢測。離心濃縮儀以其高通量、快速、避免交叉污染等優(yōu)勢,迅速成為蛋白質組學測試中的必bei 儀器。
濃縮儀的選擇
北京吉艾姆儀器有限公司作為國產(chǎn)離心濃縮儀行業(yè)先鋒,打破國外濃縮儀壟斷局面,產(chǎn)品性能達到國際水平。吉艾姆作為青蓮百奧長期友好合作伙伴,其CV200離心濃縮儀和CV600冷凍離心濃縮儀已服務多年。以其穩(wěn)定的性能和專業(yè)周到的售后部門,受到客戶的信賴。
為提高濃縮速率,加大檢測通量。吉艾姆憑借近十年的專業(yè)知識及研發(fā)經(jīng)驗,設計出更緊湊、功能更強大的金剛1000系列—全自動溶劑蒸發(fā)工作站。
金剛1000溶劑蒸發(fā)工作站
試用評價:
青蓮百奧作為蛋白組學方向試用者,使用3周后給出以下使用評價:
1) 干燥時間縮短一倍以上;
2) 一體機占臺面小,液晶屏操作簡單;
3)保存?zhèn)€性濃縮方案,可一鍵啟動
金剛1000系列溶劑蒸發(fā)工作站的特點:
• 內置雙高功率紅外燈,加快濃縮速率
• 一體式機型,占地面積小
• 樣品防護:防暴沸技術協(xié)同非接觸式控溫,防止樣品暴沸及過熱分解
• 高通量:多樣本平行處理
• 高效去除DMF和DMSO等高沸點溶劑
• 智能化蒸發(fā)系統(tǒng):一鍵啟動,數(shù)據(jù)全過程記錄。
• 樣品回收率高達95%以上
• 適用于組學研究、藥物化學、天然產(chǎn)物發(fā)現(xiàn)、分析及檢測等樣品前處理需要
未來,吉艾姆公司將深入踐行“持續(xù)創(chuàng)新、提升服務理念”奮力成為具有國際競爭力的真空濃縮儀設備制造供應商。
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