PEI線性轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染步驟及應(yīng)用
PEI線性轉(zhuǎn)染試劑是一種基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的高性能基因轉(zhuǎn)染工具,通過陽離子聚合物與核酸的靜電結(jié)合實現(xiàn)高效、低毒的細胞內(nèi)基因遞送。核心原理:PEI分子富含氨基,在生理pH下帶正電荷,可與帶負電的DNA/RNA緊密結(jié)合形成納米復(fù)合物。該復(fù)合物通過細胞表面負電荷蛋白多糖吸附,經(jīng)胞吞作用進入細胞后,PEI的“質(zhì)子海綿效應(yīng)”吸收溶酶體內(nèi)H?,導(dǎo)致溶酶體膨脹破裂,釋放核酸至細胞質(zhì),從而實現(xiàn)基因表達。
PEI線性轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染步驟:
1、復(fù)合物制備:
稀釋核酸:將DNA/RNA(0.5~5μg)加入50~100μL無血清培養(yǎng)基中,輕柔混勻。
稀釋PEI:按優(yōu)化后的N/P比取PEI,加入等體積無血清培養(yǎng)基,渦旋1~2秒。
混合:將PEI溶液逐滴加入核酸溶液中,邊加邊渦旋,室溫靜置5~15分鐘(避免沉淀)。
2、轉(zhuǎn)染細胞:
吸去細胞培養(yǎng)基,更換為含低血清的培養(yǎng)基(如DMEM+0.5%FBS)。
將PEI-核酸復(fù)合物逐滴加入細胞中,輕晃培養(yǎng)板混勻。
3、培養(yǎng)條件:
瞬時轉(zhuǎn)染:4~6小時后更換為完q培養(yǎng)基(含10%~20%FBS),繼續(xù)培養(yǎng)24~48小時檢測表達。
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染:48小時后添加選擇性培養(yǎng)基(如抗生素篩選),持續(xù)培養(yǎng)1~2周。
PEI線性轉(zhuǎn)染試劑的應(yīng)用場景:
1、重組蛋白生產(chǎn):在HEK293和CHO細胞中高效表達抗體、病毒載體(如AAV)。
2、基因功能研究:通過過表達或敲低特定基因,研究其在細胞信號、疾病模型中的作用。
3、細胞治療開發(fā):遞送CRISPR/Cas9等基因編輯工具,或轉(zhuǎn)染CAR基因制備CAR-T細胞。
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