2017天天干天天射,午夜影院在线视频,久久成人免费,sxx免费看视频

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測(cè)定儀|樣品前處理|試驗(yàn)機(jī)|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>其他文章>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題與解答

來(lái)源:北京蘭博利德商貿(mào)有限公司   2025年07月21日 09:29  

在分子生物學(xué)研究中,雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)因其高靈敏度、操作便捷和結(jié)果可靠,被廣泛應(yīng)用于啟動(dòng)子活性分析、miRNA靶基因驗(yàn)證、轉(zhuǎn)錄因子功能研究等領(lǐng)域。然而,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中常常會(huì)遇到各種問(wèn)題,例如熒光值異常、重復(fù)性差等,這些問(wèn)題可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。為了幫助大家更好地掌握這一技術(shù),我們整理了雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中的常見(jiàn)問(wèn)題與解答,涵蓋了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、操作細(xì)節(jié)、數(shù)據(jù)分析等多個(gè)方面,希望這些內(nèi)容助您輕松搞定實(shí)驗(yàn)!


Q1:雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)可應(yīng)用于哪些研究方向?

A1:①驗(yàn)證microRNA同mRNA靶向互作;②驗(yàn)證microRNA同lncRNA/circRNA靶向互作;③驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄因子與啟動(dòng)子互作;④啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)分析⑤啟動(dòng)子SNP分析


Q2:如何選擇報(bào)告基因載體?

A2:螢火蟲(chóng)熒光素酶基因和海腎基因(內(nèi)參)在同一個(gè)載體上,選擇pmirGLO等載體;螢火蟲(chóng)熒光素酶基因和海腎基因(內(nèi)參)分別在一個(gè)載體上,可選擇pGL3/pRL系列載體;載體詳細(xì)信息可參考【干貨分享】手把手教你做雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)。


Q3:如何選擇主報(bào)告基因和內(nèi)參基因的質(zhì)粒比例?

A3:通常,主報(bào)告基因質(zhì)粒與內(nèi)參質(zhì)粒的比例,建議作一個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn)來(lái)調(diào)整(如螢火蟲(chóng)載體與海腎載體比例分別用1:10、1:20、1:50、1:100)確保內(nèi)參基因被準(zhǔn)確檢測(cè)且不干擾主報(bào)告基因的表達(dá)。


Q4:如何保證檢測(cè)數(shù)據(jù)的有效性和真實(shí)性?

A4:①設(shè)立對(duì)照和重復(fù):實(shí)驗(yàn)中應(yīng)設(shè)立陽(yáng)性和陰性對(duì)照,以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的有效性且需要做3個(gè)或3個(gè)以上復(fù)孔,并且引入另一個(gè)報(bào)告基因作為內(nèi)參,主要是同批次樣品檢測(cè)值也可能出現(xiàn)浮動(dòng),排除多種干擾因素的影響(細(xì)胞狀態(tài)、轉(zhuǎn)染效率、載體質(zhì)量、裂解速度、加樣精準(zhǔn)度等)。②熒光值控制:熒光值過(guò)高可能會(huì)超出儀器的檢測(cè)范圍,導(dǎo)致無(wú)法檢測(cè)到值,一般建議將熒光值控制在5-6位之間。


Q5:熒光值過(guò)高或過(guò)低怎么辦?

A5:熒光值過(guò)高:可減少質(zhì)粒轉(zhuǎn)染量,或?qū)α呀猱a(chǎn)物進(jìn)行稀釋后檢測(cè);熒光值過(guò)低:可能是轉(zhuǎn)染效率低或裂解不充分,建議優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件、增加細(xì)胞量或延長(zhǎng)裂解時(shí)間。


Q6:復(fù)孔間重復(fù)性差如何解決?

A6:確保樣本均一性,裂解后離心取上清檢測(cè);定期校準(zhǔn)移液器,保證加樣準(zhǔn)確性;轉(zhuǎn)染時(shí)混合的力度/細(xì)胞量/時(shí)間等保持一致(同個(gè)數(shù)量級(jí)內(nèi)的差異是可以接受的)。


Q7:雙熒光素酶檢測(cè)需要使用什么檢測(cè)板?

A7:建議使用全白板,優(yōu)勢(shì)是靈敏度最高而且孔間相互干擾最小。


Q8:雙熒光素酶檢測(cè)需要使用什么儀器?

A8: 化學(xué)發(fā)光儀或帶化學(xué)發(fā)光檢測(cè)模塊的酶標(biāo)儀。


Q9:海腎和螢火蟲(chóng)是在同一個(gè)孔里面檢測(cè)嗎?能否分開(kāi)檢測(cè)?

A9:同一個(gè)孔里檢測(cè),不會(huì)相互影響,蘭博利德的海腎熒光素酶底物中有淬滅螢火蟲(chóng)熒光值的物質(zhì)??梢苑珠_(kāi)檢測(cè),但是在一個(gè)孔里檢測(cè)會(huì)更加準(zhǔn)確。


Q10:實(shí)驗(yàn)過(guò)程有哪些注意事項(xiàng)?

A10:①樣品混勻:保證裂解產(chǎn)物與底物快速混合、混合時(shí)間一致,避免熒光素酶衰變的影響。細(xì)胞裂解產(chǎn)物處理:細(xì)胞裂解產(chǎn)物常溫不超過(guò)6小時(shí);-20℃一個(gè)月;-80℃半年。    反應(yīng)體系:雙熒光素酶反應(yīng)體系:20?μl(細(xì)胞裂解產(chǎn)物)、100?μl(螢火蟲(chóng)熒光素酶底物)、100?μl(海腎熒光素酶底物),底物量可根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整,但一定要保證底物過(guò)量,不然會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)大的偏差。

 

相關(guān)產(chǎn)品信息:

更多疑問(wèn)與咨詢,歡迎聯(lián)系Lablead…….

相關(guān)推薦:【干貨分享】手把手教你做雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)


免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開(kāi)通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618