ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌技術(shù)要點(diǎn)
1. 手工洗板:
操作步驟:每次反應(yīng)溫育后,將反應(yīng)液吸出或甩干,然后在板孔中加滿洗液,放置2~3分鐘,再將洗液吸出或甩干并用吸水紙拍干。重復(fù)洗滌3~4次,最后拍干。
注意事項(xiàng):
洗液量:加入的洗液量應(yīng)以剛滿反應(yīng)孔為限,避免孔口內(nèi)有游離酶未洗凈。
避免孔間污染:吸液或甩干時(shí)要垂直,避免交叉感染。
吸水紙:使用一次性吸水紙,選擇不易脫落碎屑的材質(zhì)。
拍干:拍干時(shí)用力要輕,避免抗原抗體復(fù)合物脫落,且時(shí)間應(yīng)盡量短以防止酶失活。
2. 洗板機(jī)洗板:
優(yōu)勢(shì):速度快,條件恒定,人為因素少。
操作要點(diǎn):
洗滌參數(shù):確保所有反應(yīng)孔的洗滌量相同,通常建議使用350μl洗滌液進(jìn)行洗滌。
洗滌次數(shù):一般要求洗滌4~5次,過多或過少都會(huì)影響結(jié)果,過多可能降低信號(hào)強(qiáng)度,過少則可能增加假陽(yáng)性。
吸液高度:調(diào)整吸液高度,避免殘留過多未結(jié)合物。
吸頭類型:浮動(dòng)洗頭可自動(dòng)調(diào)整,剛性洗頭需要精確調(diào)整吸液高度。
3. 洗板技術(shù):
洗滌量:根據(jù)試劑盒推薦,調(diào)整至足夠覆蓋整個(gè)反應(yīng)孔壁的量。
吸液操作:垂直倒液,迅速、干脆,避免手腕左右搖擺或旋轉(zhuǎn)。
殘留液體:殘留量越少,背景信號(hào)越低,但需避免吸頭壓得太緊導(dǎo)致吸液效率降低。
4. 洗液配方:
非離子型洗滌劑:如吐溫20,濃度在0.05%~0.2%之間,過高會(huì)解吸附抗原或抗體。
流水沖洗:適用于微量滴定板,增加水流量或水壓可增強(qiáng)洗滌效果,但需注意防止孔間污染。
5. 洗滌緩沖液:
配制:使用新鮮無污染的蒸餾水或去離子水配制,避免結(jié)晶影響。
使用:現(xiàn)配現(xiàn)用,確保洗液新鮮。
6. 洗滌后的處理:
拍干:拍干后應(yīng)盡快進(jìn)行下一步操作,減少暴露時(shí)間以防止酶失活。
板布局:記錄每次洗滌的順序,確保每個(gè)孔的顯色時(shí)間一致。
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