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各種細胞免疫檢測方法比較

來源:上海北諾生物科技有限公司   2013年04月15日 11:22  
類型 檢測名稱 檢測方法 主要特點
體內(nèi)功能檢驗 遲發(fā)型超敏反應(yīng)法 皮下注射抗原或者負載抗原的DC,觀察紅斑、硬塊的發(fā)生與大小 優(yōu)點:體內(nèi)功能性檢驗,相對比較容易操作;
缺點:只是一種初篩,加陽性與假陰性比較嚴重。
體外表型檢測 TCR可變區(qū)分析法 使用針對T細胞受體(TCR)可變區(qū)的流式抗體來對表達特定可變區(qū)的T細胞計數(shù) 優(yōu)點:可以提供關(guān)于可變區(qū)使用的群體分布;
缺點:識別同一種抗原的TCR的可變區(qū)可能不相同;單抗不夠豐富,不能檢測所有種類的可變區(qū)。
多肽MHC四聚體法(Tetramer) 用熒光標記的MHC-肽四聚體去結(jié)合T細胞,進而做流式分析 優(yōu)點:能做精細分析,靈敏較高;
缺點:只能分析MHC-I類分子,四聚體制備復(fù)雜,成本高昂,需要預(yù)先合成T細胞表位肽。
TCR CDR3序列分析 用PCR的方法擴增T細胞受體互補決定區(qū)3的序列,測序 特點:簡單靈敏,但還不能用于群體分析;
該方法目前剛剛開展,還不能全面評價。
體外功能檢測 細胞因子ELISPOT法 抗原與待測PBMC混合,通過ELISPOT檢測陽性細胞頻率 優(yōu)點:靈敏度zui高,單細胞水平,特異性強,結(jié)果直觀可信,成本低,高通量;
缺點:血液PBMC的分離還未實現(xiàn)自動化;還有待于發(fā)展雙因子、多因子ELISPOT技術(shù)。
淋巴細胞增殖試驗(3H胸苷摻入法) 待測PBMC、輻射過的APC、抗原混合孵育,特異性的T細胞增殖,通過摻入的3H胸苷來確定增殖水平 優(yōu)點:是傳統(tǒng)方法,研究比較透徹;
缺點:需要放射性操作,非特異性反應(yīng)比較強,并且靈敏度低。
細胞內(nèi)細胞因子染色法 抗原與待測PBMC混合,把細胞因子保留在細胞內(nèi),然后用流式抗體染色、計數(shù) 優(yōu)點:單細胞水平,可以同時檢測多個參數(shù)、多種因子;
缺點:操作復(fù)雜,靈敏度相對較低,容易出現(xiàn)假陽性。
細胞因子ELISA法 抗原與待測PBMC混合,然后用定量ELISA法測量細胞受刺激而分泌到上清液中的細胞因子濃度 優(yōu)點:特異性強,可以對細胞因子濃度定量,有以全血作為檢測樣品的潛力;
缺點:只能做群體水平檢測,靈敏度不夠高。
細胞因子mRNA定量法 通過定量RT-PCR方法檢測受刺激的細胞中細胞因子mRNA的水平 優(yōu)點:有利用各種組織樣品的潛力,靈敏度高,高通量;
缺點:容易出現(xiàn)假陽性,只能做群體水平檢測。
CTL殺傷法(51Cr釋放法) 制備51Cr標記的表達抗原的靶細胞,與待測PBMC混合,通過51Cr釋放來確定靶細胞被殺傷的水平 優(yōu)點:zui直接的功能性檢測;
缺點:靶細胞制備困難,試驗周期長,需要放射性操作,靈敏度低。
極限稀釋計數(shù)CTL法 待測PBMC稀釋到一系列孔中,體外增殖,然后加入靶細胞判定每孔裂解的陰陽性,zui后通過泊松統(tǒng)計法確定CTL極限稀釋倍數(shù) 優(yōu)點:對CTL的頻率計數(shù)比直接CTL殺傷法更準確,靈敏度也有所提高;
缺點:實驗及其復(fù)雜,工作量極大,并且因為有些CTL前體細胞不能增值而導(dǎo)致結(jié)果偏低。

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