臍帶

膠原酶消化液 胰蛋白酶 膠原酶 彈性蛋白酶 DMEM

眼科剪 滴管 離心機 培養(yǎng)皿 CO2培養(yǎng)箱

一、實驗步驟

1.  冰冷無菌D-Hanks’液中漂洗，用眼科剪仔細清除脂肪、包膜、血管等組織，轉入青霉素小瓶中，加入少量無菌D-Hanks’液，用眼科剪剪成0.1-1.0 mm³ 大小的碎片。

2.  用滴管輕輕吸出上層細小脂肪碎塊和油滴，再用無菌D-Hanks’液反復清洗8~10 次。

3.  加入 10 倍體積無菌膠原酶消化液(1  mg/mL)，室溫消化30 min，1000 rpm離心 5 min，棄上清，加1 mg/mL胰蛋白酶 37℃消化 20 min，再次離心5 min，棄上清。

4.  加入胰蛋白酶 37℃消化20 min，再次離心5 min，棄上清。

5.  加膠原酶(1 mg/mL)彈性蛋白酶(0.5 mg/mL) 混合消化液 37℃消化 20 min，再離心5 min，棄消化液。

6.  加混合消化液 37℃消化 20 min，再次離心 5 min，細胞加含 10% FBS的DMEM培養(yǎng)基重懸，轉入培養(yǎng)皿 37℃、5% CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)即可。