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中級會(huì)員 | 第18年
血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的鑒別方法及作用2016/08/24
血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的鑒別方法及作用：血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內(nèi)抽出，放入試管中，不加抗凝劑，則凝血反應(yīng)被激活，血液迅速凝固，形成膠凍。其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清，也可于凝血后經(jīng)離心取得。在凝血過程中，纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊，所以血清中無纖維蛋白原，這一點(diǎn)是與血漿的區(qū)別。而在凝血反應(yīng)中，血小板釋放出許多物質(zhì)，各凝血因子也都發(fā)生了變化。這些成分都留在血清中并繼續(xù)發(fā)生變化，如凝血酶原變成凝血酶，并隨血清存放時(shí)間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區(qū)別之處。但大量未參加凝血
細(xì)胞培養(yǎng)基大全2016/08/24
細(xì)胞培養(yǎng)基是人工模擬細(xì)胞在體內(nèi)生長的營養(yǎng)環(huán)境，是提供細(xì)胞營養(yǎng)和促進(jìn)細(xì)胞生長增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。培養(yǎng)液或培養(yǎng)基的含義幾乎相同，英文都是medium。當(dāng)它是粉劑時(shí)，傾向性地稱為培養(yǎng)基，而將粉劑配成液體后，多稱為培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中常常補(bǔ)加血清、抗生素等成分。培養(yǎng)基主要包括天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基和無血清細(xì)胞培養(yǎng)基等。天然細(xì)胞培養(yǎng)基是人們早期采用的細(xì)胞培養(yǎng)基，直接取自于動(dòng)物組織提取液或體液，如血漿凝塊、血清、淋巴液、胚胎浸出液等。營養(yǎng)價(jià)值高，但成分復(fù)雜，差異大、不穩(wěn)定，來源也受到限制。水解乳蛋白和膠原是
抗體純化的方法2016/08/22
制備高特異性、價(jià)的抗體是實(shí)驗(yàn)免疫學(xué)技術(shù)的基礎(chǔ)，抗體質(zhì)量的高低將直接影響試驗(yàn)的成敗。通過不同方法制備的抗體往往與多種雜蛋白混雜在一起，為了獲得成分相對單一的抗體或?qū)⒖贵w用于特定的用途，就需要進(jìn)行抗體純化。抗體純化分了幾種類型，根據(jù)用途決定選擇哪種方法進(jìn)行純化：1.粗純：將制備抗體的血清或是腹水，細(xì)胞上清，直接用鹽析法進(jìn)行處理，這樣可以將這些物質(zhì)里面的其他雜質(zhì)去掉，獲得蛋白的成分，但是由于是粗純，里面會(huì)混有大量的其他蛋白，這樣獲得的抗體，純度較低，用于實(shí)驗(yàn)中背景比較高。2.通用型純化：用抗體結(jié)合蛋白
細(xì)胞純化2016/07/29
一、人工純化人工純化，即利用人為手段造成某一細(xì)胞生長有利的環(huán)境條件，抑制其他細(xì)胞的生長從而達(dá)到純化細(xì)胞的目的。1、酶消化法酶消化法是比較常用的純化方法，不僅對貼壁細(xì)胞可行，能利用上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞對胰蛋白酶的耐受性不同，使兩者分開，達(dá)到純化的目的，對貼壁細(xì)胞與半貼壁及粘附細(xì)胞間的分離純化也是十分有效的。(1)上皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞的分離純化兩者在胰蛋白酶的作用下，由于成纖維細(xì)胞先脫壁，而上皮細(xì)胞要消化相當(dāng)長的時(shí)間才脫壁，特別是在原代細(xì)胞初次傳代和早期傳代中兩種差別尤為明顯，故可采用多次差別消化方
免疫組化的方法和優(yōu)點(diǎn)2016/07/08
一、免疫組化技術(shù)的基本原理應(yīng)用免疫學(xué)及組織化學(xué)原理，對組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的某些化學(xué)成分進(jìn)行原位的定性、定位或定量研究，這種技術(shù)稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。*，抗體與抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性。免疫組化正是利用這一特性，即先將組織或細(xì)胞中的某些化學(xué)物質(zhì)提取出來，以其作為抗原或半抗原去免疫小鼠等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，制備特異性抗體，再用這種抗體(抗體)作為抗原去免疫動(dòng)物制備第二抗體，并用某種酶(常用辣根過氧化物酶)或生物素等處理后再與前述抗原成分結(jié)合，將抗原放大，由于抗體與抗原結(jié)合后形成的免疫
培養(yǎng)細(xì)胞的起源2016/07/08
大多數(shù)人是在標(biāo)準(zhǔn)條件下用有限或連續(xù)細(xì)胞系開展工作的.所以,考慮培養(yǎng)物中的細(xì)胞成分非常重要.如細(xì)胞在誘導(dǎo)條件下表現(xiàn)分化特征,要么意味著培養(yǎng)的細(xì)胞是成熟的,保持其持續(xù)合成特殊蛋白質(zhì)的能力就夠了;要么意味著培養(yǎng)細(xì)胞由前體細(xì)胞或干細(xì)胞組成,這些細(xì)胞有增殖能力,美工維持未分化狀態(tài),當(dāng)有了合適的誘導(dǎo)條件,其中的一些或全部細(xì)胞會(huì)成熟并分化.有指導(dǎo)意義的考慮是,把培養(yǎng)物看成是由多能干細(xì)胞,未分化的定向前體細(xì)胞和成熟細(xì)胞組成的平衡狀態(tài),并且,這種平衡可隨環(huán)境條件變化而改變.在細(xì)胞密度較低的情況下,連續(xù)傳代可促進(jìn)細(xì)
移液器操作的13種技巧2016/06/16
移液器操作的13種技巧技巧1：一致性在按壓與釋放定位銷時(shí)，需要保持一致的節(jié)奏、速度和技法。吸液速度過快會(huì)導(dǎo)致套柄與活塞噴濺、產(chǎn)生氣霧以及受到污染，甚至導(dǎo)致樣品量損耗。一致性可使準(zhǔn)確度提高達(dá)5%。技巧2：正確填充吸頭當(dāng)某一吸頭的建議（標(biāo)稱）范圍為吸頭容量（標(biāo)稱容量）的10%至100%時(shí)，可在35%至100%這一較小以及優(yōu)化的范圍內(nèi)實(shí)現(xiàn)度。在如此小的范圍內(nèi)移液會(huì)減少對操作人員技法的要求，并可將結(jié)果準(zhǔn)確度提高約1%。當(dāng)達(dá)到標(biāo)稱容量的50%時(shí)可提供*結(jié)果。技巧3：吸液時(shí)保持垂直入水角使入水角盡可能地接近
百得移液器的維修保養(yǎng)2016/06/07
百得移液器的維修保養(yǎng)為使您使用的移液器始終保證*結(jié)果，就要每天檢查移液器是否清潔，尤其要注意吸液嘴連件部分。一、清潔并消毒移液器，只需在移液器表面噴上移液器消毒劑或酒精，再用軟布擦干。建議定期清潔并消毒移液器吸液嘴連件。二、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)保養(yǎng)1．吸液嘴推出器向下推到底；2．將拆卸工具銷插在吸液嘴推出桿和推出軸中間部分，撥定裝置；3．仔細(xì)松開吸液嘴推出器，取下吸液嘴推出軸；4．將拆卸工具的扳手端卡在吸液嘴連件上，逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)。切莫使用其他工具。5ml吸液嘴連件不需工具，直接逆時(shí)針旋下即可；5．取下吸液嘴連
培養(yǎng)基的制備方法及基本原則2016/06/07
培養(yǎng)基的制備方法及基本原則培養(yǎng)基一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。供微生物、植物組織和動(dòng)物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料。不用的培養(yǎng)基的成分不同，但是步驟卻大徑相同。培養(yǎng)基的制備方法1.配料配方換算→在容器中加入少量水（蒸餾水，自然水）→按照配方稱取各種藥品（依次加入）→加足所需水量（一藥一勺，取藥后立即蓋上瓶蓋）。2.溶解淀粉溶解：少量冷水調(diào)成糊狀加熱溶解，特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基，一定要煮沸，瓊脂的熔解溫度95-97℃，且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。3.
如何避免血清中沉淀物的產(chǎn)生2016/05/18
血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機(jī)物等，這些物質(zhì)對促進(jìn)細(xì)胞生長或抑制生長活性是達(dá)到生理平衡的。我們科研人員在保存血清的時(shí)候，如何避免沉淀物的產(chǎn)生?1、解凍血清時(shí)，請按照所建議的逐步解凍法（-2O。C至4。C至室溫），若血清解凍時(shí)改變的溫度太大（如-20。C至37。C），實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。2、解凍血清時(shí)，請隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。3、請勿將血清置于37。C太久。若在37。C放
血清使用和處理中有哪些常見問題2016/05/11
1.保存血清的方法建議血清應(yīng)保存在-5℃至-2O℃。若存放于4℃時(shí)，請勿超過一個(gè)月。一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。2.如何解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品品質(zhì)受損將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。3.血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，血纖維蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解凍后，也會(huì)存在于血清中，亦
培養(yǎng)基如何消除組織培養(yǎng)的污染？2016/05/06
培養(yǎng)基一類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長?？傊琈EM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，各種目的無血清培養(yǎng)的是AIMV培養(yǎng)基（SFM）。在開始進(jìn)行新的細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，如何消除組織培養(yǎng)的污染？可以參考下表所列的條件：如何消除組織培養(yǎng)的污染？當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時(shí)，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母，把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開，用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái)，檢查HEPA過濾器。高濃度的抗
流式細(xì)胞儀的工作原理2016/04/28
流式細(xì)胞儀主要由四部分組成：流動(dòng)室和液流系統(tǒng)，激光源和光學(xué)系統(tǒng)，光電管和檢測系統(tǒng)，計(jì)算機(jī)和分析系統(tǒng)。四大系統(tǒng)共同完成信號的產(chǎn)生、轉(zhuǎn)換和傳輸任務(wù)。檢測時(shí)將待測細(xì)胞或微粒制成細(xì)胞懸液，進(jìn)行熒光染色后加入樣品管中。以一定壓力將待測樣品壓人流動(dòng)室，在高壓下磷酸緩沖液（鞘液）從鞘液管噴出，鞘液管人口方向與待測樣品流成一定角度，這樣，鞘液就能夠包繞著樣品高速流動(dòng)，組成一個(gè)圓形流束（鞘流），待測細(xì)胞在鞘液包繞下單行排列，依次通過檢測區(qū)。流式細(xì)胞儀通常以激光作為發(fā)光源。經(jīng)過聚焦后的光束，垂直照射在樣品流上，當(dāng)細(xì)
瓊脂糖凝膠電泳2016/04/26
瓊脂糖凝膠電泳是分離鑒定和純化DN段的常用方法。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動(dòng)時(shí)有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)，DNA分子在高于等電點(diǎn)的pH溶液中帶負(fù)電荷，在電場中向正極移動(dòng)。由于糖磷酸骨架在結(jié)構(gòu)上的重復(fù)性質(zhì)，相同數(shù)量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此它們能以同樣的速度向正極方向移動(dòng)。不同濃度瓊脂糖凝膠可以分離從200bp至50kb的DN段。在瓊脂糖溶液中加入低濃度的溴化乙錠（ethidumbromide,EB），在紫外光下可以檢出10ng的DNA條帶，在電場中，pH8.0條件下，凝膠中帶負(fù)電荷的DN
單克隆抗體鑒定2016/04/26
抗體的鑒定對制備的McAb進(jìn)行系統(tǒng)的鑒定是十分必要的，應(yīng)做下述幾個(gè)方面的鑒定：1．抗體特異性的鑒定除用免疫原（抗原）進(jìn)行抗體的檢測外，還應(yīng)該用與其抗原成分相關(guān)的其它抗原進(jìn)行交叉試驗(yàn)，方法可用ELISA、IFA法。例如：①制備抗黑色素瘤細(xì)胞的McAb，除用黑色素瘤細(xì)胞反應(yīng)外，還應(yīng)該用其它臟器的腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞進(jìn)行交叉反應(yīng)，以便挑選腫瘤特異性或腫瘤相關(guān)抗原的單克隆抗體。②制備抗重組的細(xì)胞因子的單克隆抗體，應(yīng)首先考慮是否與表達(dá)菌株的蛋白有交叉反應(yīng)，其次是與其它細(xì)胞因子間有無交叉。2．McAb的Ig類
胎牛血清的功能2016/04/21
血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機(jī)物等，這些物質(zhì)對促進(jìn)細(xì)胞生長或抑制生長活性是達(dá)到生理平衡的。胎牛血清采用健康母牛懷孕的八月齡胎牛血液為原料，經(jīng)無菌采集、分離、微孔過濾后而成。所以胎牛血清是品質(zhì)也是的，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對細(xì)胞有害的成分zui少。胎牛血清的功能：1.提供
抗體保存的Z佳方法2016/04/21
抗體保存的*方法不同的實(shí)驗(yàn)使用的抗體也大為不同，根據(jù)試驗(yàn)應(yīng)用的類型、樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)、樣本的種屬、抗體宿主的種類以及抗體的標(biāo)記和檢測具體情況選擇zui符合實(shí)驗(yàn)實(shí)際操作情況的單抗和二抗。于此同時(shí)抗體的保存方法也有區(qū)別，具體講解如下：一、腹水：腹水重組后可加入少量疊氮納等來阻止細(xì)菌生長。腹水應(yīng)當(dāng)凍存。單抗能夠小包裝保存以避免反復(fù)凍融。若要保存較長時(shí)間，則不要在4℃。和血清不同，腹水中含有蛋白酶，會(huì)使抗體效價(jià)下降，因此加入蛋白酶抑制劑可以選擇。二、純IgG:不要稀釋抗體后來保存，除非加入羊血清BSA
細(xì)胞培養(yǎng)常見問題2016/04/21
細(xì)胞培養(yǎng)常見問題1.冷凍管應(yīng)如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入37°C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。2.細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí)，是否應(yīng)馬上去除DMSO？除少數(shù)特別注明對DMSO敏感之細(xì)胞外，絕大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞），在解凍之后，應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無法生長或貼附
抗原的制備方法2016/04/20
實(shí)驗(yàn)步驟一、抗原的提取抗原的制備是一件十分細(xì)致的工作，要制備一個(gè)高純度的抗原，需要付出艱巨的努力，制備工作涉及物理學(xué)、化學(xué)和生理學(xué)等許多領(lǐng)域的知識。根據(jù)物理或化學(xué)特性建立起來的分離、純化方法的主要原理不外乎二個(gè)方面：①利用混合物中幾個(gè)組分分配率的差別將他們分配到可用機(jī)械方法分離的兩個(gè)或幾個(gè)物相中，如鹽析、有機(jī)溶劑抽提、層析和結(jié)晶等；②把混合物置于單一物相中，通過物理力場的作用使各組分分配于不同的區(qū)域而達(dá)到分離的目的，如電泳、超速離心和超濾等。由于組織細(xì)胞內(nèi)存著許多分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)不同的抗原物質(zhì)
細(xì)胞轉(zhuǎn)染2016/03/30
細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗(yàn)中，其應(yīng)用越來越廣泛。簡介轉(zhuǎn)染，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例；化學(xué)介導(dǎo)方法很多，如經(jīng)
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