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上海北諾生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第14年
T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)的基本原理2014/11/25
T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)的基本原理T細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí),受到非特異性有絲分裂原（如PHA、ConA）刺激后,可出現(xiàn)細(xì)胞體積增大,代謝旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化.淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的高低可以反映機(jī)體的細(xì)胞免疫水平,因此可作為測(cè)定機(jī)體免疫功能的指標(biāo)之一.T細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí),受到非特異性有絲分裂原（如PHA、ConA）刺激后,可出現(xiàn)細(xì)胞體積增大,代謝旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化.淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的高低可以反映機(jī)體的細(xì)胞免疫水平,因此可作為測(cè)定機(jī)體免疫功能的指標(biāo)之一.淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)
細(xì)胞的復(fù)蘇及凍存方法2014/11/25
細(xì)胞的復(fù)蘇及凍存方法一.細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng)將液氮或-80℃保存的腫瘤細(xì)胞于37℃水浴，快速溶化，用8.0ml培養(yǎng)基混勻已融化的腫瘤細(xì)胞懸液，于1500轉(zhuǎn)/分，離心3分鐘。棄上清，再吸取8.0ml培養(yǎng)基質(zhì)混勻細(xì)胞沉淀，再1500轉(zhuǎn)/分，離心3分鐘，棄上清，細(xì)胞沉淀用1.0ml培養(yǎng)基混勻，備用。另取一個(gè)75cm2方瓶，加入14.0ml培養(yǎng)基質(zhì)，將上述制備的含腫瘤細(xì)胞懸液(1.0ml)加入此方瓶中，于37℃，5%CO2孵育箱中培養(yǎng)。若此腫瘤細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)，大約3－4天細(xì)胞基質(zhì)會(huì)變黃，5.0ml細(xì)胞懸液可傳代
影響細(xì)胞生長(zhǎng)的幾點(diǎn)因素2014/11/25
影響細(xì)胞生長(zhǎng)的幾點(diǎn)因素，摘要：細(xì)胞在體外進(jìn)行培養(yǎng),失去了機(jī)體的調(diào)節(jié)和控制,因此,除滿足營(yíng)養(yǎng)的要求外,還必須使細(xì)胞生存環(huán)境晝接近活體的環(huán)境.外環(huán)境的培養(yǎng)條件如溫度、滲透壓、酸堿度等均能影響細(xì)胞的生長(zhǎng).一、溫度：一般哺乳類及禽類細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度是37~38℃.溫度過(guò)高或過(guò)低都會(huì)影響到細(xì)胞的生長(zhǎng).細(xì)胞耐受低溫的能力比抗熱的能力強(qiáng),在低溫下,細(xì)胞的代謝活力及核分裂降低.溫度低于0℃時(shí),雖影響細(xì)胞代謝,但并無(wú)傷害作用.把細(xì)胞置于23~25℃時(shí),細(xì)胞仍能生存和生長(zhǎng),但速度減緩,不過(guò),魚(yú)類細(xì)胞的適宜培養(yǎng)
細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題解答2014/11/25
1冷凍管應(yīng)如何解凍?取出冷凍管后，須立即放入37°C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過(guò)冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。2細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí)，是否應(yīng)馬上去除DMSO?除少數(shù)特別注明對(duì)DMSO敏感之細(xì)胞外，絕大部分細(xì)胞株(包括懸浮性細(xì)胞)，在解凍之后，應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)或貼附之問(wèn)題。3可否使用與
果蠅數(shù)量性狀實(shí)驗(yàn)2014/11/14
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?、以果蠅（Drosophilamelanogaster）腹片著生的小剛毛為對(duì)象，研究數(shù)量性狀遺傳的特點(diǎn)。2、學(xué)習(xí)估算遺傳（heritability）【實(shí)驗(yàn)原理】在生物中凡是可數(shù)、可度、可衡等并可用數(shù)字形式描述的性狀，稱數(shù)量性狀（quantitativecharacter）。數(shù)量性狀大都由多基因控制。一般，控制同一性狀的基因數(shù)目很多，而每個(gè)基因的作用很小，并且很容易受環(huán)境影響。群體的表型變量通常呈連續(xù)分布?！緦?shí)驗(yàn)儀器、材料和試劑】本實(shí)驗(yàn)采用18#和22#品系果蠅的雜交后代為材料，用恒
生物信息學(xué)技術(shù)：基因芯片實(shí)驗(yàn)原理與方法2014/11/14
本實(shí)驗(yàn)的目的是學(xué)會(huì)cDNA芯片的使用方法。了解各種基因芯片的基本原理和優(yōu)缺點(diǎn)?；蛐酒@一技術(shù)方法在1991年的Science雜志上被提出，其高通量、并行檢測(cè)的特點(diǎn)適應(yīng)了分析人類基因組計(jì)劃所提供的海量的基因序列信息的需要，可以說(shuō)，人類基因組計(jì)劃是基因芯片技術(shù)發(fā)展的原因，而對(duì)深人研究基因突變和基因表達(dá)的有效方法的需求又是促進(jìn)基因芯片技術(shù)發(fā)展的動(dòng)力。由于基因芯片高速度、高通量、集約化和低成本的特點(diǎn)，基誕生以來(lái)就受到科學(xué)界的廣泛關(guān)注，正如晶體管電路向集成電路發(fā)展的經(jīng)歷一樣，分子生物學(xué)技術(shù)的集成化正在使
植物學(xué)技術(shù)：細(xì)胞傷口愈合實(shí)驗(yàn)2014/11/06
原理：細(xì)胞傷口愈合實(shí)驗(yàn)被研究者廣泛應(yīng)用和改進(jìn)，用來(lái)研究各種實(shí)驗(yàn)條件比如基因敲除和化療在細(xì)胞遷移和增殖中的作用。該實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，費(fèi)用廉價(jià)，實(shí)驗(yàn)條件容易根據(jù)不同的目的改進(jìn)。該方法的基本原理是，在單層培養(yǎng)細(xì)胞間制作劃痕以產(chǎn)生愈傷區(qū)域，然后監(jiān)控該傷口周圍細(xì)胞的向劃痕遷移的現(xiàn)象，即傷口愈合。改變細(xì)胞遷移和/或生長(zhǎng)的因素可以增加或降低傷口愈合率。該方法可以定量，適用于自動(dòng)化系統(tǒng)高通量篩選。材料和儀器：1.人MDA-MB-231cell(ATCC#HTB-26)2.DMEM培養(yǎng)基(Invitrogen#103
植物學(xué)技術(shù)：植物原生質(zhì)體的制備2014/11/06
原生質(zhì)體是指植物細(xì)胞去掉細(xì)胞壁的裸露部分。它在培養(yǎng)條件下，①具有再生細(xì)胞壁，進(jìn)行連續(xù)的細(xì)胞分裂并再生成完整植株的能力；②具有攝取外源大分子、細(xì)胞器，以及細(xì)菌，病毒的能力，因此是進(jìn)行遺傳操作，基因轉(zhuǎn)移的好材料；③通過(guò)同種和異種植物的原生質(zhì)體融合，可產(chǎn)生異核體，實(shí)現(xiàn)體細(xì)胞雜交，培育出新品種。實(shí)驗(yàn)原理去掉植物細(xì)胞壁的方法可以是機(jī)械的人工操作，也可以利用酶解法。較早利用機(jī)械法制備原生質(zhì)體的*Klercker（1892），直到1960年英國(guó)科學(xué)家Cocking才*次用酶法大量制備原生質(zhì)體。本實(shí)驗(yàn)以植物的葉
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)：大鼠胰腺移植模型制作2014/10/21
胰腺移植是目前臨床上有效治療I型糖尿病，挽救II型糖尿病晚期伴腎功能不全的外科手段，因此，胰腺移植一直受到廣泛的關(guān)注，至今圍繞著胰腺移植，仍有許多問(wèn)題需要解決，這些問(wèn)題的基礎(chǔ)研究都需要在合適的動(dòng)物模型上進(jìn)行，其中大鼠因?yàn)槠涑杀镜?，?lái)源易，免疫系統(tǒng)與人類相似等優(yōu)點(diǎn)，是目前器官移植領(lǐng)域流行的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之一。但是大鼠胰腺移植模型的建立是一個(gè)難度很大的實(shí)驗(yàn)外科技術(shù)，操作復(fù)雜，成功率低。因此，需要建立一種比較規(guī)范，操作簡(jiǎn)便，模型穩(wěn)定且成功率高的胰腺移植模型的方法，以利于進(jìn)行胰腺移植的基礎(chǔ)研究。一、手術(shù)器械顯
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù):激光掃描共聚焦顯微鏡操作步驟及注意事項(xiàng)2014/10/21
激光掃描共聚焦顯微鏡可測(cè)定的樣品種類很多．包括生物材料、組織(切片)、細(xì)胞(亞細(xì)胞)結(jié)構(gòu)等。樣品中熒光的來(lái)源主要有如下幾種：自發(fā)熒光(autofluorescence)、熒光染色、免疫熒光、熒光蛋白、誘發(fā)熒光(inducedfluorescence)及酶致熒光(enzymaticallyproducedfluorescence)等等。其中大部分熒光素的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)均可在儀器自帶軟件的染料信息庫(kù)中找到。1．觀察步驟及儀器操作根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求制備樣品完畢后。即可進(jìn)行觀察。基本步驟如下：(1)開(kāi)啟儀器電
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)：轉(zhuǎn)基因小鼠制備實(shí)驗(yàn)2014/10/21
1、選取7~8周齡雌性小鼠，陰道口封閉，作為供體，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10IU）。2、47~48小時(shí)后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8IU），并與正常公鼠合籠；另取數(shù)只適齡母鼠（2月齡以上）作為受體，陰道口潮紅，與結(jié)扎公鼠合籠。3、第二天上午9:00前觀察供體、受體，有精栓者拿出備用。受體籠拿出作好隔離措施。4、10:30左右，斷頸處死供體，手術(shù)取出整個(gè)輸卵管，放入透明質(zhì)酸酶~0.3mg/M2液中。顯微鏡下，用鑷子撕開(kāi)輸卵管壺腹部，受精卵隨同顆粒細(xì)胞即一同流出。5、仔細(xì)觀
微生物學(xué)技術(shù)：噬菌體的檢查及效價(jià)測(cè)定2014/08/14
一、目的：1.了解噬菌體效價(jià)的含義及其測(cè)定原理。2.學(xué)會(huì)檢查噬菌體的方法。3.掌握用雙層瓊脂平板法測(cè)定噬菌體效價(jià)的操作技能。二、原理：噬菌體是一類專性寄生于細(xì)菌和放線菌等微生物的病毒，其個(gè)體形態(tài)極其微小，用常規(guī)微生物計(jì)數(shù)法無(wú)法測(cè)得其數(shù)量。當(dāng)烈性噬菌體侵染細(xì)菌后會(huì)迅速引起敏感細(xì)菌裂解，釋放出大量子代噬菌體，然后它們?cè)贁U(kuò)散和侵染周圍細(xì)胞，zui終使含有敏感菌的懸液由混濁逐漸變清，或在含有敏感細(xì)菌的平板上出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的空斑──噬菌斑。了解噬菌體的特性，快速檢查、分離，并進(jìn)行效價(jià)測(cè)定，對(duì)在生產(chǎn)和科研工作
微生物學(xué)技術(shù)：紫外線滅菌實(shí)驗(yàn)2014/08/14
標(biāo)簽：紫外線滅菌紫外線滅菌是用紫外線燈進(jìn)行的，波長(zhǎng)為200~300nm的紫外線都有殺菌能力，其中以260nm的殺菌力zui強(qiáng)。在波長(zhǎng)一定的條件下，紫外線的殺菌效率與強(qiáng)度和時(shí)間的乘積成正比。紫外線殺菌機(jī)制主要是因?yàn)樗T導(dǎo)了胸腺嘧啶二聚體的形成，從而抑制了DNA的復(fù)制。實(shí)驗(yàn)方法紫外線滅菌實(shí)驗(yàn)方法原理由于輻射能使空氣中的氧電離成［O］，再使O2氧化生成臭氧（O3）或使水（H2O）氧化生成過(guò)氧化氫（H2O2），O3和H2O2均有殺菌作用。紫外線穿透力不大，所以，只適用于無(wú)菌室、接種箱、手術(shù)室內(nèi)的空氣及物
微生物學(xué)技術(shù)：用比濁法測(cè)定大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線2014/08/14
(一)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私饧?xì)菌生長(zhǎng)曲線的持點(diǎn)及測(cè)定原理，學(xué)會(huì)用比濁法測(cè)定細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線。(二)實(shí)驗(yàn)原理將一定數(shù)量的細(xì)菌，接種于適宜的液體培養(yǎng)基中，在適溫下培養(yǎng)，定時(shí)取樣測(cè)數(shù)，以菌數(shù)的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，生長(zhǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，作出的曲線稱為生長(zhǎng)曲線。該曲線表明細(xì)菌在一定的環(huán)境條件下群體生長(zhǎng)與繁殖的規(guī)律。一般分為延緩期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期及衰亡期四個(gè)時(shí)期，各時(shí)期的長(zhǎng)短同菌種本身特征、培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件不同而異。比濁法是根據(jù)細(xì)菌懸液細(xì)胞數(shù)與混濁度成正比，與透光度成反比關(guān)系，利用光電比色計(jì)測(cè)定細(xì)胞懸液的光密度(即OD值)，
微生物學(xué)技術(shù):PCR法檢測(cè)支原體2014/08/14
PCR法是20世紀(jì)80年代中期建立起來(lái)的一種體外DNA擴(kuò)增技術(shù)，其基本原理是酶促DNA合成反應(yīng)，即在DNA模板、引物和脫氧核糖核酸存在下，經(jīng)DNA聚合酶的作用，使DNA鏈擴(kuò)增延伸。該方法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、快速的特點(diǎn)，但其對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境的要求嚴(yán)格，實(shí)驗(yàn)成本較高，有時(shí)還有假陽(yáng)性的現(xiàn)象出現(xiàn)。1、儀器設(shè)備超凈工作臺(tái)、PCR儀、電泳儀、凝膠成像分析系統(tǒng)、臺(tái)式離心機(jī)、旋渦混懸器等。2、實(shí)驗(yàn)試劑選用美國(guó)Stratagene公司生產(chǎn)的支原體檢測(cè)試劑盒（內(nèi)有引物、陽(yáng)性對(duì)照、內(nèi)對(duì)照、StrataCleanresi
微生物學(xué)技術(shù)：高壓蒸汽滅菌實(shí)驗(yàn)2014/08/14
標(biāo)簽：高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個(gè)密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過(guò)加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時(shí)由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌器內(nèi)的壓力，從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100℃的溫度。導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。實(shí)驗(yàn)方法高壓蒸汽滅菌實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法原理在使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時(shí)，滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否*極為重要，因?yàn)榭諝獾呐蛎泬捍笥谒羝呐蛎泬?，所以，?dāng)水蒸汽中含有空氣時(shí)，在同一壓力下，含空氣蒸
微生物學(xué)技術(shù)：微生物的接種、分離和培養(yǎng)2014/08/12
一、目的要求1、掌握各種分離、接種方法。2、掌握無(wú)菌操作基本環(huán)節(jié)。二、實(shí)驗(yàn)說(shuō)明微生物在自然界中呈混雜狀態(tài)存在，要獲得所需菌種，必需從中把它們分離出來(lái)。在保存菌種時(shí)不慎受到到污染也需予以分純。微生物分離和純化的方法很多，但基本原理卻是相似的，即將待分離的樣品進(jìn)行一定的稀釋，并使微生物的細(xì)胞（或孢子）盡量以分散狀態(tài)存在，然后使其長(zhǎng)成一個(gè)個(gè)純種單菌落。然而上述工作又離不開(kāi)接種，即將一種微生物移到另一滅過(guò)菌的培養(yǎng)基上的過(guò)程。三、實(shí)驗(yàn)材料1、恒溫培養(yǎng)箱。2、接種環(huán)、玻璃棒、吸管、酒精燈。3、培養(yǎng)基（上次實(shí)
微生物學(xué)技術(shù)：微生物鑒定中常用的生化反應(yīng)2014/08/12
實(shí)驗(yàn)原理有些細(xì)菌具有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解為麥芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不再變藍(lán)色。細(xì)菌產(chǎn)生的脂肪酶能分解培養(yǎng)基中的脂肪生成甘油及脂肪酸。脂肪酸可以使培養(yǎng)基pH下降，可通過(guò)在油脂培養(yǎng)基中加入中性紅做指示劑進(jìn)行測(cè)試。中性紅指示范圍為pH6.8（紅）～8.0（黃）。當(dāng)細(xì)菌分解脂肪產(chǎn)生脂肪酸時(shí)，則菌落周圍培養(yǎng)基中出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)。某些細(xì)菌分泌蛋白酶分解明膠，產(chǎn)生小分子物質(zhì)。如果細(xì)菌具有分解明膠的能力，則培養(yǎng)基可由原來(lái)固體狀態(tài)變成液體狀態(tài)。牛乳中主要含有乳糖、酪蛋白等成
微生物學(xué)技術(shù):微生物的分離純化及稀釋平板菌落計(jì)數(shù)2014/08/12
實(shí)驗(yàn)原理稀釋平板測(cè)數(shù)是根據(jù)微生物在高度稀釋條件下固體培養(yǎng)基上所形成的單個(gè)菌落是由一個(gè)單細(xì)胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計(jì)的計(jì)數(shù)方法，即一個(gè)菌落代表一個(gè)單細(xì)胞。計(jì)數(shù)時(shí)，首先將待測(cè)樣品制成均勻的繁殖稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開(kāi)，使其成單個(gè)細(xì)胞存在，否則一個(gè)菌落就不只是代表一個(gè)細(xì)胞，再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后，由單個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖形成菌落，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目，即可計(jì)算出樣品中的含菌數(shù)。此記數(shù)方法所計(jì)算的菌數(shù)是培養(yǎng)基上長(zhǎng)出來(lái)的菌落數(shù)，故又稱活菌計(jì)數(shù)。
免疫學(xué)技術(shù)專題：非標(biāo)記抗體免疫電鏡技術(shù)2014/06/18
一、原理標(biāo)記抗體法雖然具有許多優(yōu)點(diǎn)，但也存在一些難以克服的問(wèn)題，如標(biāo)記抗體的分子增大，對(duì)細(xì)胞膜和組織的穿透力減弱；化學(xué)交聯(lián)反應(yīng)對(duì)抗體和酶的活性有所影響；結(jié)合物中未標(biāo)記的抗體可與抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，影響檢測(cè)方法的敏感性等。不標(biāo)記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過(guò)一系統(tǒng)的非標(biāo)記抗體的免疫學(xué)反應(yīng)，對(duì)組織中的抗原進(jìn)行定位檢測(cè)。不標(biāo)記抗體法又可分為用標(biāo)記物顯示和不同標(biāo)記物顯示兩種方法。前者利用基因工程方法制備雙特異性抗體的F(ab′)2，一個(gè)Fab片段與標(biāo)本中的抗原結(jié)合，一個(gè)Fab是抗體蛋白的結(jié)合片段。在抗
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