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外周血淋巴細胞染色體標本制備與分析2017/04/18
1.轉(zhuǎn)化細胞采血及接種培養(yǎng)1.1在酒精燈火焰上，用滅菌注射器（一次性注射器）抽取肝素0.2ml，使肝素濕潤至管壁。1.2常規(guī)消毒后，采集外周靜脈血5ml，轉(zhuǎn)動注射器使血液與肝素混勻。1.3在超凈工作臺中，預先將RPMI1640液體培養(yǎng)基（5ml，含植物血凝素60mg/ml、10%小牛血清）加入消毒好的小培養(yǎng)瓶中，再滴加25滴全血（6號針頭），水平搖動混勻。1.4置37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時。培養(yǎng)過程中每天水平搖動培養(yǎng)物1～2次，使血液均勻懸浮，再繼續(xù)培養(yǎng)。1.5終止培養(yǎng)前2～4小時，加入秋水
il-7細胞來源和主要功能2017/04/13
腫瘤細胞來源：il-7是由骨髓基質(zhì)細胞分泌的糖蛋白，分子量為25kd；其基因位于第8號染色體?，F(xiàn)多采用基因工程手段，從轉(zhuǎn)染含il-7cdna表達性質(zhì)粒的哺乳類細胞培養(yǎng)上清中獲取il-7。il-7的靶細胞主要為淋巴細胞，對來自人或小鼠骨髓的b祖細胞、胸腺細胞及外周成熟的t細胞等均有促生長活性。腫瘤細胞主要功能：（1）、與干細胞生長因子（scf）協(xié)同能夠刺激b前體發(fā)生有絲分裂，這一效應可被tgf和所抑制；但對b祖細胞（pro-b）的生長沒有明顯作用。（2）、促進雙陰性胸腺細胞的成熟，提供胚胎胸腺細胞
人正常組織來源細胞染色體制備方法2017/04/11
1、人正常組織來源細胞實驗材料培養(yǎng)液（PRMI1640、M199、DMEM等），小牛血清、0.025%胰蛋酶、秋水仙素，刻度離心管，直吸管及彎頭吸管，培養(yǎng)瓶或皿、KCL、甲醇、冰乙酸、載玻片。2、培養(yǎng)液配制培養(yǎng)液85-95%小牛血清5-15%雙抗（選擇）100u/ml3、人正常組織來源細胞操作過程（1）培養(yǎng)細胞：選擇處于指數(shù)生長期、用大瓶培養(yǎng)的80-90%匯合單層培養(yǎng)細胞；（2）終止培養(yǎng)：當有大量圓形發(fā)亮細胞出現(xiàn)時，加秋水仙素0.01-0.03ug/ml培養(yǎng)混合液，置溫箱繼續(xù)培養(yǎng)6-10小時以抑
利用同源重組構(gòu)建基因敲除動物模型的基本步驟2017/04/06
①.人正常組織來源細胞基因載體的構(gòu)建：把目的基因和與細胞內(nèi)靶基因特異片段同源的DNA分子都重組到帶有標記基因(如neo基因，TK基因等)的載體上，成為重組載體?；蚯贸菫榱耸鼓骋换蚴テ渖砉δ埽砸话阍O計為替換型載體。②.ES細胞的獲得：現(xiàn)在基因敲除一般采用是胚胎干細胞，zui常用的是鼠，而兔，豬，雞等的胚胎干細胞也有使用。常用的鼠的種系是129及其雜合體，因為這類小鼠具有自發(fā)突變形成畸胎瘤和畸胎肉瘤的傾向，是基因敲除的理想實驗動物。而其他遺傳背景的胚胎人正常組織來源細胞也逐漸被發(fā)展應用
人正常組織來源細胞周期的測定方法2017/04/01
一、人正常組織來源細胞原理細胞周期指細胞一個世代所經(jīng)歷的時間。從一次細胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個周期。細胞周期反應了細胞增殖速度。單個細胞的周期測定可采用縮時攝影的方法，但它不能代表細胞群體的周期，故現(xiàn)多采用其他方法測群體周期。測定細胞周期的方法很多，有同位素標記法、細胞計數(shù)法等，這里介紹一種利用BrdU滲入測定細胞周期的方法。BrdU(5-溴脫氧尿嘧啶核苷)加入培養(yǎng)基后，可做為細胞DNA復制的原料，經(jīng)過兩個細胞周期后，細胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/2，反映在染色體上應表現(xiàn)為一
動物細胞培養(yǎng)條件分析2017/03/30
轉(zhuǎn)化細胞在所有的細胞離體培養(yǎng)中，zui困難的是動物細胞培養(yǎng)。下面是它所需要的特殊條件。⑴血清:動物細胞離體培養(yǎng)常常需要血清。zui常用的是小牛血清。血清提供生長必需因子，如激素、微量元素、礦物質(zhì)和脂肪。有一天人們真正學會了配制和血清一樣的培養(yǎng)液，那時血清才可被取代。在這里，血清等于是動物細胞離體培養(yǎng)的天然營養(yǎng)液。⑵支持物:大多數(shù)動物轉(zhuǎn)化細胞有貼壁生長的習慣。離體培養(yǎng)常用玻璃，⑶氣體交換:二氧化碳和氧氣的比例要在細胞培養(yǎng)過程中不斷進行調(diào)節(jié)，不斷維持所需要的氣體條件，每一次開箱操作后的快速恢復對設備
細胞培養(yǎng)中使用血清的缺點2017/03/28
腫瘤細胞血清成分復雜，雖含許多對細胞有利成分，也含有對細胞有害的成分，使血清有幾個明顯的缺點：●對大多數(shù)細胞，在體內(nèi)狀態(tài)，血清不是它們接觸的生理學液體，只是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸血清，因此使用血清有可能改變某種細胞在體內(nèi)的正常狀態(tài)，血清可能促進某些細胞的生長(成纖維細胞)同時抑制另一類細胞生長(表皮細胞)?！裱搴恍δ[瘤細胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì)，如多胺氧化酶，能與來自高度繁殖細胞的多胺反應(如精胺、亞精胺)形成有細胞毒性作用的聚精胺。補體、抗體、細菌毒素等都會影響細胞生長，甚至造成細胞
TFAR19蛋白的細胞定位分析2017/03/23
人正常組織來源細胞材料試劑：FITC標記的單克隆抗體，pH7.4、0.15Mol/LPBS，3%的多聚甲醛，PBS-T(pH7.4、0.15Mol/LPBS含0.2%Tween20)，胎牛血清，熒光細胞洗液：pH7.4、0.15Mol/LPBS含2%胎牛血清及0.1%NaN3。FACS管，Tip頭，移液器。儀器：低溫水平離心機,37°C水浴箱，熒光顯微鏡，共聚焦激光掃描顯微鏡，流式細胞計方法：1懸浮細胞的染色：(1)收獲正常和誘導凋亡的細胞(0.5~1′106)，PBS洗2次，1000rpm′1
多孔塑料培養(yǎng)板單細胞克隆法分析2017/03/21
1.轉(zhuǎn)化細胞消化：取健康待克隆細胞，吸出瓶內(nèi)培養(yǎng)液，加消化液。2.低密度細胞懸液的制備：做克隆細胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細胞懸液，然后稀釋細胞，使之成為1~2細胞/毫升懸液，zui適宜細胞密度為1~2細胞/ml培養(yǎng)液。3.接種：先用吸管輕輕吹打細胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時要迅速準確，爭取在zui短時間內(nèi)加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。4.標記：培養(yǎng)6~12小時后，待細胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光
單個細胞分離培養(yǎng)技術分析2017/03/16
材料1．轉(zhuǎn)化細胞的制備經(jīng)過原代或傳代培養(yǎng)的細胞。2．培養(yǎng)用液克隆適應培養(yǎng)液、Hanks液、0.125％胰蛋白酶。3．培養(yǎng)用品包括直徑為0.5mm，長為8mm的毛細玻璃管，培養(yǎng)瓶皿、培養(yǎng)板（24孔、96孔）、吸管、微量加樣器等。方法1．稀釋克隆法（1)毛細管克隆法1)將一定量的細胞懸液（如105個／ml或更低）倍比稀釋至1個／ml;2）取l0ml稀釋的細胞懸液，用直徑為0.5mm，長為8mm的毛細玻璃管若干（30～50支），在負壓作用下，將懸液吸入各毛細管中；3）在倒置顯微鏡下檢查出每管只有1個細
細胞內(nèi)堿性蛋白和酸性蛋白的顯示原理和方法2017/03/14
原理轉(zhuǎn)化細胞由于不同的蛋白質(zhì)分子所帶的堿性和酸性基團的數(shù)目不同，在pH值不同的溶液中，蛋白質(zhì)分子所帶的凈電荷多少不同。如在生理條件下，整個蛋白質(zhì)所帶負電荷多，則為酸性蛋白質(zhì)；帶正電荷多，則為堿性蛋白質(zhì)。據(jù)此，可將標本經(jīng)三氯醋酸處理提出核酸后，用不同pH值的固綠染液分別染色，細胞內(nèi)的酸性蛋白和堿性蛋白質(zhì)顯示出來。轉(zhuǎn)化細胞方法1．以破壞脊髓法處死蟾蜍，將其腹面向上放人蠟盤中，剪開胸腔，打開心包。小心將心臟剪一小口，取心臟血一滴滴在干凈載玻片一端，推片，按此法制備二張血涂片，室溫晾干。2.將涂片作好標
轉(zhuǎn)化細胞計數(shù)原理和計數(shù)方法2017/03/09
轉(zhuǎn)化細胞實驗原理測定微生物細胞數(shù)量的方法很多，通常采用的有顯微直接計數(shù)法和稀釋平板計數(shù)法。直接計數(shù)法適用于各種單細胞菌體的純培養(yǎng)懸浮液，如有雜菌或雜質(zhì)，則難于直接測定。菌體較大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球計數(shù)板，一般細菌則采用彼得羅夫·霍澤(PetrofHausser)細菌計數(shù)板。兩種計數(shù)板的原理和部件相同、只是細菌計數(shù)板較薄，可以使用油鏡觀察。而血球計數(shù)板較厚，不能使用油鏡，計數(shù)板下部的細菌難于區(qū)分。血球汁數(shù)板是一塊特制的厚型載玻片，載玻片上有4條槽所構(gòu)成的3個平臺。中間的平臺較寬，其中間又被
細胞培養(yǎng)液如何選配2017/03/07
1.人正常組織來源細胞選擇培養(yǎng)基沒有一定的標準，某種培養(yǎng)基可以適合多種細胞，某種細胞也可以在不同培養(yǎng)液中生長。但是，建立某種細胞株所用的培養(yǎng)基應該是培養(yǎng)這種細胞的培養(yǎng)基。可以查閱參考文獻，或在購買細胞株時咨詢。2.1640的確是非常便宜的培養(yǎng)基，也很好用。但是，它的緩沖力zui弱，所以有時會對細胞的生長狀態(tài)有影響，尤其是一些實驗室長期傳代狀態(tài)不好的細胞。有條件還是用DMEM培養(yǎng)基。3.一旦在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時，放入4度冰箱。應該在2到3周內(nèi)用完它。因為，一些抗生素和血清中的基本成分
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