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人正常組織來源細胞分裂增殖與生長發(fā)育的能力2018/05/22

人正常組織來源細胞原代培養(yǎng)是從體內(nèi)取出組織細胞開始培養(yǎng)到*次進行傳代之前的時期，是一個特征性的必然的生長階段，完成了從體內(nèi)到體外環(huán)境的過度和適應(yīng)過程，恢復(fù)了分裂增殖與生長發(fā)育的能力。其性狀似體內(nèi)，可表達某些形態(tài)、結(jié)構(gòu)、更能，更能代表活體細胞zui接近在體使的情況傳代期--細胞系：將原代培養(yǎng)物經(jīng)過分割，重新接種到兩個或兩個以上的器皿內(nèi)進行培養(yǎng)，進入傳代培養(yǎng)期，是整個培養(yǎng)過程的主要時期。原代培養(yǎng)物要經(jīng)過反復(fù)傳代，傳代培養(yǎng)期要經(jīng)過反復(fù)傳代。傳代培養(yǎng)期并不單指培養(yǎng)物經(jīng)傳代后的*代培養(yǎng)過程，而是指由傳代開

人正常組織來源細胞復(fù)蘇和傳代流程2018/05/17

一、人正常組織來源細胞實驗前準備工作：1、培養(yǎng)瓶的包被：包被液如多聚賴氨酸（PLL，ScienCell品牌，貨號0403或0413）或纖維粘連蛋白（BPF，ScienCell品牌，貨號8248），以無菌水稀釋至2ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。37度孵箱1小時或4度過夜，從包被好的培養(yǎng)瓶中回收多聚賴氨酸，并用無菌水洗滌培養(yǎng)瓶2遍。包被好的培養(yǎng)瓶不要放置超過24小時，其中的包被液可吸出重復(fù)使用2-3次，注意不要污染。2、*培養(yǎng)基的配置：以內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基（ECM，ScienCell品牌，貨號1001）

如何繼續(xù)培養(yǎng)已購買的干細胞2018/05/15

為避免客戶接收不當(dāng)造成干細胞死亡。我公司溫馨提示;細胞一般經(jīng)我司培養(yǎng)兩周復(fù)蘇后送與客戶。因細胞是冷凍保存，我司均以冰袋加泡沫箱快遞運輸.客戶在接收細胞產(chǎn)品時，需按以下方法操作。避免細胞出現(xiàn)其他問題。1.收到細胞株包裹時，請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形，若有請立即通知。細胞株請盡速開始培養(yǎng)，或立即冷凍保存(置于–70°C，隔夜后，移到液氮)。2.冷凍細胞解凍程序:2.1.依據(jù)細胞株數(shù)據(jù)單之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它之成份和比例，制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之

發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化細胞的“保護傘”2018/05/10

轉(zhuǎn)化細胞是機體zui快速分裂的細胞，總是在忙于生成新細胞來取代不斷脫落的細胞。然而研究表明，不同于身體其他部位的干細胞，腸道中的干細胞被隱藏了起來，并且這有著充分的理由。華盛頓大學(xué)醫(yī)學(xué)院的一項新研究表明，干細胞定位在腸道的一些“口袋”中，避免了與腸道有益微生物生成的一種重要代謝產(chǎn)物接觸。這種代謝產(chǎn)物：丁酸限制了干細胞增殖，有可能阻礙了炎性腸?。↖BD）如克羅恩病和結(jié)腸炎造成損傷后腸道修復(fù)自身。研究人員證實，腸壁內(nèi)一些稱作為Leiberkuhn隱窩的微小口袋通常保護了干細胞免受丁酸傷害。但當(dāng)腸道受

轉(zhuǎn)化細胞或組織化學(xué)染色的相關(guān)問題2018/05/08

附上我們這里轉(zhuǎn)化細胞的組化步鄹：（切片復(fù)溫涼干完畢）1。加入配好的0.3%的過氧化氫甲醇溶液（甲醇80ml＋0.01MPBS20ml＋30%過氧化氫1ml）30min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的影響，0.01MPBS清洗5min×3；2。加入配好的0.3%TritonX100（30%TritonX1001ml＋0.01MPBS100ml）30min，以增加細胞的通透性，0.01MPBS清洗5min×3；3。加入用血清稀釋液（牛血清白蛋白1.00g＋0.01MPBS100ml＋疊氮納0.08g＋30

干細胞再生研究新發(fā)現(xiàn)2018/04/26

心外膜是位于心臟表面的一層間干細胞組成的膜，在心臟發(fā)育過程中起著重要的作用。缺少心外膜的心臟是不能正常發(fā)育的，缺少心外膜的小鼠死于胚胎早期。雖然心外膜在心臟發(fā)育過程中有著重要的作用，但在成體心臟受損修復(fù)過程中，心外膜如何發(fā)揮其重要功能還不清楚。過去研究發(fā)現(xiàn)了一組可培植心肌細胞的干細胞。研究人員認為當(dāng)病人心臟出現(xiàn)問題時，便會失去驅(qū)動心跳的心肌細胞。*的補救方法就是更多這類細胞。研究組利用轉(zhuǎn)基因小鼠模型發(fā)現(xiàn)：心外膜細胞在心臟受損后發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換（EMT），形成間充質(zhì)樣細胞，通過分泌大量促血管新生因

轉(zhuǎn)化細胞三個小經(jīng)驗2018/04/17

1.轉(zhuǎn)化細胞培養(yǎng)不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子，覺得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑？知道為什么嗎？燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時候，熾熱的空氣進入瓶內(nèi)。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷，壓力驟降，培養(yǎng)基中的碳酸就會轉(zhuǎn)化成二氧化碳，釋放出來。培養(yǎng)基中的碳酸少了，當(dāng)然會變堿。如果不燒瓶口的話，你會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會大大減慢。（當(dāng)然多多少少還是會有一點越用越堿，因為室溫還是比冰箱內(nèi)的溫度高）其實燒瓶口防止污染純粹

轉(zhuǎn)化細胞同源移植也會發(fā)生排斥反應(yīng)2018/04/12

對于轉(zhuǎn)化細胞形成的畸胎瘤/，由iPS形成的畸胎瘤中的某些基因呈高水平表達。其中的Zg16及Hormad1兩個基因的異常表達可直接導(dǎo)致遭受特異的免疫攻擊。徐洋表示這些基因在正常情況下處于關(guān)閉狀態(tài)直至胚胎開始對自身組織形成免疫耐受為止，如此就能確保它們不會被宿主所識別。而iPS的重編程程序有可能改變了這些基因的正常表達。然而徐洋的研究發(fā)現(xiàn)對于iPS研究領(lǐng)域的科研人員而言未必是悲慘的消息。長久以來，科學(xué)家們在開展iPS研究的過程中把iPS衍生獲得的終末分化細胞例如神經(jīng)細胞或心肌細胞移植到小鼠體內(nèi)，證實

誰動了你的轉(zhuǎn)化細胞？2018/04/10

當(dāng)我們在養(yǎng)轉(zhuǎn)化細胞的時候，有可能會出現(xiàn)如下的狀況：細胞生長緩慢細胞變形碎片增加懸浮細胞容易成團培養(yǎng)基提前變色鏡下發(fā)現(xiàn)有小黑點如果排除了其他試劑選擇不當(dāng)、細胞株老化、細菌污染等原因，而仍有上述一種或幾種情況，則高度提示：細胞可能出現(xiàn)了支原體污染。污染的支原體在顯微鏡下無法看到，但它對細胞危害卻很大。它使細胞狀態(tài)不佳，生長速度慢，同時DNA、RNA及蛋白表達發(fā)生改變，嚴重影響實驗結(jié)果，造成實驗數(shù)據(jù)不準確和時間精力的浪費。下面小編給你介紹一款有效預(yù)防和祛除支原體的神器ZellShieldTM，希望能對

轉(zhuǎn)化細胞稀釋液測定原理2018/04/08

轉(zhuǎn)化細胞測定原理：血液經(jīng)稀酸稀釋后，紅細胞全部被溶解，注入計數(shù)池后，在顯微鏡下計數(shù)。試劑組成：液體100ml×1瓶，4℃保存6個月。操作過程：小試管1支，加白細胞稀釋液0.38ml。用微量吸管準確吸取末稍血20μl，擦去管尖外部余血，將吸管插入小試管中稀釋液的底部，輕輕將血放出，并吸取上層清液，漱洗吸管二次，zui后用手搖動試管混和。充池，靜置2～3分鐘，待白細胞下沉。用低倍鏡計數(shù)四角4個大方格內(nèi)的白細胞數(shù)。計算公式：白細胞濃度（個/L）=4個大方格內(nèi)白細胞總數(shù)÷4×10×20×106即：4個大

轉(zhuǎn)化細胞復(fù)蘇如何去保存呢？2018/04/03

1、凍存轉(zhuǎn)化細胞從液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，輕輕搖動冷凍管，使其在1分鐘內(nèi)全部融化（不要超過3分鐘）。2、解凍后的細胞可直接接種到含*生長培養(yǎng)液的細胞培養(yǎng)瓶中直接進行培養(yǎng)，24小時后再用新鮮*培養(yǎng)液替換舊培養(yǎng)液，以去除DMSO。3、如果細胞對冷凍保護劑特別敏感，解凍后的細胞應(yīng)先通過離心去除冷凍保護劑，然后再接種到含*生長培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中。如果知道細胞的凍存那么就必定聽說過細胞復(fù)蘇實驗。今日詳談細胞復(fù)蘇，整理實驗保存。實驗步驟一共是五個，保存的方法是三個。下面就來看看為您整理出的實驗步驟

轉(zhuǎn)化細胞的各種結(jié)構(gòu)2018/03/29

我們來簡單地了解下轉(zhuǎn)化細胞的各種結(jié)構(gòu)：*、顯微結(jié)構(gòu)：在普通光學(xué)顯微鏡中能夠觀察到的細胞結(jié)構(gòu)。第二、亞顯微結(jié)構(gòu)：在普通光學(xué)顯微鏡下觀察不能分辨清楚的細胞內(nèi)各種微細結(jié)構(gòu)。第三、原核細胞：細胞較小，沒有成形的細胞核。組成核的物質(zhì)集中在核區(qū)，沒有染色體，DNA不與蛋白質(zhì)結(jié)合，無核膜、無核仁；細胞器只有核糖體；有細胞壁，成分與真核細胞不同。第四、真核細胞：細胞較大，有真正的細胞核，有一定數(shù)目的染色體，有核膜、有核仁，一般有多種細胞器。第五、原核生物：由原核細胞構(gòu)成的生物。如：藍藻、綠藻、細菌（如硝化細菌、

如何分離血液中的干細胞！2018/03/27

人體中含有大量的干細胞組織，其中白細胞的檢測有我們息息相關(guān)，那么白細胞怎么分離呢，今天特地為大家編輯整理了白細胞怎么分離的相關(guān)知識，不知道大家感不感興趣呢？血液中紅細胞與白細胞比例約600～1000：1，兩者的比重不同其沉降速度亦異。本法是利用血細胞自然沉降率的分離法，采集血液后應(yīng)及時抗凝，通常選用肝素抗凝法。肝素能阻止凝血酶原轉(zhuǎn)化為凝血酶，從而抑制纖維蛋白原形成纖維蛋白而防止血液凝固。操作原則是將含抗凝血的試管直立靜置室溫30～60min后，血液分成明顯三層，上層為淡黃色血漿，底層為紅細胞，緊

干細胞的軟瓊脂集落培養(yǎng)實驗2018/03/22

干細胞實驗方法原理HL-60細胞是一種急性早幼粒細胞白血病細胞，在體外無需加刺激因子，可在軟瓊脂培養(yǎng)基中形成集落。二甲基亞砜是一種細胞分化誘導(dǎo)劑，經(jīng)二甲基亞砜處理后的HL-60細胞按粒系途徑定向成熟分化，同時細胞的增殖力降低，幾乎全部細胞喪失了軟瓊脂中形成集落的能力。因此，這種方法可用于細胞分化的基礎(chǔ)研究和臨床腫瘤治療的療效檢驗等方面。實驗材料HL-60細胞試劑、試劑盒小牛血清RPMI1640培養(yǎng)液臺盼蘭瓊脂二甲基亞砜儀器、耗材超凈工作臺二氧化碳培養(yǎng)箱顯微鏡培養(yǎng)瓶吸管酒精燈血細胞計數(shù)板多孔培養(yǎng)板

維持人正常組織來源細胞正常生長的方法2018/03/20

人正常組織來源細胞在培養(yǎng)過程中如果環(huán)境不適合其生長就會出現(xiàn)部分細胞的老化現(xiàn)象。這是干細胞培養(yǎng)的一個難點也是經(jīng)常出現(xiàn)的問題。本文描述干細胞老化時出現(xiàn)的跡象，以及其預(yù)防措施。1)接種密度的影響：部分干細胞具有一定的分泌性能，能夠分泌一些對細胞有支持能力的因子類物質(zhì)；所以必須維持一定的接種密度，否則會導(dǎo)致細胞增殖減慢，zui后出現(xiàn)老化；2)消化過度：消化細胞時會對細胞的表面蛋白有較強的損傷，所以消化的時間不能過長，使用合適濃度和pH值的消化酶，否則會導(dǎo)致細胞老化和分化；3)合適的密度的時候就要傳代：細

轉(zhuǎn)化細胞鈣依賴性的功能2018/03/13

MR也是轉(zhuǎn)化細胞上一種跨膜受體,其功能的發(fā)揮是鈣依賴性的。MR在胞外有三個結(jié)構(gòu)域,分別為富含亮氨酸的CR結(jié)構(gòu)域、II型纖維連接蛋白結(jié)構(gòu)域、八個串連的C型凝集素樣結(jié)構(gòu)域,膜上存在跨膜結(jié)構(gòu)域,胞內(nèi)含有短尾巴結(jié)構(gòu)域。MR具有內(nèi)外源性配體雙重識別功能,三個胞外結(jié)構(gòu)域能夠識別特異性糖組分及蛋白并與之結(jié)合,識別的多糖分子中含有甘露糖和巖藻糖殘基,其中II型纖維連接蛋白結(jié)構(gòu)域具有結(jié)合I、II、III和IV型膠原蛋白的特性。MR被認為是一個非典型的模式識別受體,在巨噬細胞參與的免疫反應(yīng)中,MR的作用包括介導(dǎo)病原

保證轉(zhuǎn)化細胞的無菌狀態(tài)2018/03/08

1.少量轉(zhuǎn)化細胞分選時，流式細胞分選度高（99%以上），速度快。目前，*流式細胞儀的分選速度可達25000個細胞/秒以上，比傳統(tǒng)的分選速度提高了很多倍，原來需要一天的工作現(xiàn)在只需要幾小時就能完成。不過流式細胞儀分離細胞的量還是有一定的限制，一次分離的zui大合理量約為108個細胞。如果細胞量超過109個，則需要耗費10小時以上，分選后細胞的活力會受到很大的影響。2.可以同時進行多個Marker分選，正選負選同時進行。以前的流式細胞儀只能給液滴充上正電荷或負電荷，因此在電場中只能向左或向右偏轉(zhuǎn)，即

轉(zhuǎn)化細胞培養(yǎng)與蛋白之間的關(guān)系2018/03/08

在轉(zhuǎn)化細胞體內(nèi)，約60%的白蛋白位于血管周隙（包括組織間隙），以保證細胞狀態(tài)的良好。白蛋白的功能現(xiàn)在還不*明了，但其生理作用非常重要，對細胞培養(yǎng)也有很重要的作用，例如可促進哺乳動物細胞的生長和提高存活率?，F(xiàn)大致歸納一下，有如下幾點：1.維持血液膠體滲透壓和pH值。在體內(nèi)生理條件下，白蛋白含量的降低會導(dǎo)致血液中的液體成分流失和組織間隙液體的增加。這可發(fā)生在營養(yǎng)缺乏、肝臟和腎臟疾病中。白蛋白是肝臟合成的，這些疫病常導(dǎo)致白蛋白含量下降。2.運輸功能。白蛋白作為一種載體，能與體內(nèi)許多難溶性的小分子有機物

轉(zhuǎn)化細胞復(fù)制周期的首要環(huán)節(jié)2018/03/08

轉(zhuǎn)化細胞為整個復(fù)制周期的首要環(huán)節(jié)，而受體是介導(dǎo)病毒吸附、內(nèi)化以及膜融合等侵入過程的關(guān)鍵宿主因子。因此，對受體的研究已經(jīng)成為了解病毒侵入機制以及開發(fā)抗病毒制劑的突破口。本綜述介紹了與皰疹病毒侵入相關(guān)的受體分子以及在這些分子介導(dǎo)下的跨膜機制，同時討論了目前皰疹病毒侵入方面仍存在的問題和未來的研究方向。皰疹病毒(Herpesviruses)是一類有囊膜的雙鏈DNA病毒，其種類繁多，能廣泛感染人類和其他脊椎動物。皰疹病毒科分為3個亞科(α、β和γ皰疹病毒)(表1)，其中甲亞科的單純皰疹病毒屬(Simpl

證明轉(zhuǎn)化細胞具有異種嵌合的能力的方法2018/03/06

轉(zhuǎn)化細胞具有多潛能的分化能力，能夠在體內(nèi)、體外分化成不同類型的細胞、組織甚至器官。通過干細胞的異種嵌合技術(shù)在豬等大動物體內(nèi)實現(xiàn)異種再造器官。然而，人類胚胎干細胞在異種體內(nèi)分化潛能尚不*清楚，細胞存活、分化識別、發(fā)育時程等關(guān)鍵問題仍未解決，依然存在嚴重的技術(shù)壁壘。近日，中國科學(xué)院動物研究所胡寶洋、李偉、周琪研究組合作，通過在Primed狀態(tài)人類胚胎干細胞中過表達抗凋亡基因BCL2及BCL2L1，并在小鼠四細胞發(fā)育時期進行胚胎注射，獲得了Primed狀態(tài)人胚胎干細胞嵌合的人-鼠異種嵌合小鼠胚胎，并證