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干細胞老化的表現(xiàn)及預防2017/07/11

干細胞在培養(yǎng)過程中如果環(huán)境不適合其生長就會出現(xiàn)部分細胞的老化現(xiàn)象。這是干細胞培養(yǎng)的一個難點也是經(jīng)常出現(xiàn)的問題。本文描述干細胞老化時出現(xiàn)的跡象，以及其預防措施。干細胞老化的表現(xiàn)★細胞胞漿內(nèi)特別是在核區(qū)附近出現(xiàn)黑色顆粒，表示細胞開始出現(xiàn)老化；★細胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)空泡，則表明該細胞已老化或者已經(jīng)開始分化（在全部細胞中出現(xiàn)少數(shù)老化細胞是正常的）；★細胞立體感逐漸消失，細胞間的間隔不清，部分細胞扁平狀，細胞的形狀趨向多樣；★貼壁性減退，出現(xiàn)一些漂浮的細胞；部分分泌強的細胞分泌物增多，細胞表面會比較臟；★細胞增

轉(zhuǎn)化細胞具有防御病毒的作用2017/07/06

轉(zhuǎn)化細胞自噬是真核生物中進化保守的對細胞內(nèi)物質(zhì)進行循環(huán)的重要過程。在該過程中，一些損壞的細胞質(zhì)蛋白或細胞器被自噬小泡包裹后，送入溶酶體(動物）或液泡（酵母和植物）中降解并得以循環(huán)利用。劉玉樂等zui早報道細胞自噬參與植物免疫，然而其機制一直不清楚。在這項研究中，研究人員發(fā)現(xiàn)細胞自噬可通過自噬蛋白ATG8與木爾坦棉花曲葉病毒（CottonleafcurlMultanvirus，CLCuMuV）衛(wèi)星分子編碼的βC1蛋白互作，進而降解βC1，從而起到抑制病毒復制的作用。βC1上第32位纈氨酸的突變消除

細胞活性檢測試劑盒實驗步驟2017/07/04

一、人正常組織來源細胞樣品準備1．準備好25cm2細胞培養(yǎng)瓶或60mm細胞培養(yǎng)皿的待測培養(yǎng)細胞（5X106細胞）2．小心加入xx毫升預冷的SBJ清理液（試劑A），覆蓋生長表面3．小心抽去清理液4．使用細胞刮脫棒輕柔刮脫細胞5．加入xx毫升SBJ清理液（試劑A），混勻細胞6．移入到預冷的15毫升錐形離心管（注意：懸浮細胞從這一步驟開始）7．放進4℃臺式離心機離心5分鐘，速度為300g8．小心抽去上清液9．加入xx微升SBJ裂解液（試劑B），充分混勻10．轉(zhuǎn)移到預冷的1.5毫升離心管11．強力渦旋震

體外培養(yǎng)細胞的分類2017/06/29

1．貼附型這類腫瘤細胞在培養(yǎng)時，能貼附在支持物表面生長。大多數(shù)培養(yǎng)細胞呈貼附型生長；只賴于貼附才能生長的細胞稱貼附型細胞或錨著依存型細胞。關于細胞的貼附過程和機制將另加敘述。當單細胞貼附在支持物上后，易失去它們在體內(nèi)時原有的特征，細胞分化現(xiàn)象常變得不顯著。在形態(tài)上常表現(xiàn)單一化的現(xiàn)象，并常反映其胚層起源，呈現(xiàn)類似前述返祖現(xiàn)象。如來源于內(nèi)、外胚層的細胞多呈上皮細胞型；來自中胚層的細胞則易呈成纖維細胞型(這種現(xiàn)象又與供體的年齡有密切的關系，原供體越幼稚則“返祖”越明顯)；顯然與細胞分化有關。由于上述原

干細胞培養(yǎng)器皿的清洗方法2017/06/27

干細胞離體條件下，有害物質(zhì)可直接與細胞接觸，細胞對任何有害甚至有益的物質(zhì)十分敏感，極少量殘留物就會對細胞產(chǎn)生毒性作用。因此，新的或重新使用的器皿都必須認真清洗，使其達到不含任何殘留物的要求。因不同培養(yǎng)器皿的材料、結構、使用方法不同，清洗的方法也有區(qū)別．現(xiàn)分別介紹如下。1．玻璃器皿的清洗，玻璃器皿的清洗一般要經(jīng)過浸泡、刷洗、浸酸和清洗四個步驟。(1)浸泡：新的或用過的玻璃器皿都需先用清水浸泡，以軟化和溶解附著物。新的玻璃器皿使用前得先用自來水簡單刷洗，然后用5％鹽酸浸泡過夜；用過的玻璃器皿往往附有

防止人正常組織來源細胞污染操作步驟2017/06/22

1.人正常組織來源細胞實驗進行前，超凈臺用紫外燈照射30～60min，然后用75%酒精擦拭超凈臺臺面，并開啟超凈臺風扇運轉(zhuǎn)10min左右再開始實驗操作。2.實驗用品用75％酒精擦拭后才能放入超凈臺內(nèi)；實驗用品用完應移出超凈臺，以利于氣流的流通。實驗完成后用75％酒精擦拭超凈臺臺面。3.每次操作只處理一種細胞；即使不同細胞使用相同的培養(yǎng)基也不要共享同一瓶培養(yǎng)基，避免細胞間的交叉污染。4.操作時小心取用無菌的物晶，避免污染。勿碰觸吸管尖頭，不小心碰觸后應立即更換；不要在打開的容器瓶口正上方操作，容器

細胞培養(yǎng)板的區(qū)別和選擇2017/06/20

（1）平底和圓底（U型和V型）培養(yǎng)板的區(qū)別和選擇不同形狀的培養(yǎng)板有不同用途。培養(yǎng)腫瘤細胞，通常是選用平底的，這樣便于鏡下觀測、有明確的底面積、細胞培養(yǎng)液面高度相對一致。因此做MTT等實驗時，無論是貼壁和懸浮細胞，一般選用平底板。測吸光值一定要使用平底的培養(yǎng)板。要特別注意材質(zhì)，標示“TissueCulture（TC）Treated”是養(yǎng)細胞用的。U型或V型板，一般在某些特殊要求時才使用。如在免疫學方面，當做兩種不同淋巴細胞混合培養(yǎng)時，需要二者相互接觸刺激，這時一般會選用U型板，因為細胞會由于重力的

人正常組織來源細胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染2017/06/15

1、人正常組織來源細胞pcDNA3.1＋-gD的線性化:pcDNA3.1＋使用說明書推薦了以下幾個酶作為線性化酶(BglⅡMfeⅡBst1107ⅠEam1105ⅠPvuⅠScaⅠSspⅠ),通過DNAMAN分析gD序列發(fā)現(xiàn)其帶有MfeⅡ酶切位點。2、轉(zhuǎn)染前一天,在60mm的dish中接種8×105個細胞,加入5ml培養(yǎng)基(含血清,不含抗生素),37℃,5%CO2培養(yǎng),至轉(zhuǎn)染時要求細胞40%-80%匯合。3、通過分光光度計測定pcDNA3.1＋-gD的濃度,用不含血清、抗生素、蛋白質(zhì)的培養(yǎng)基稀釋2

人正常組織來源細胞培養(yǎng)注意事項2017/06/13

人正常組織來源細胞培養(yǎng)注意事項1.玻璃吸管和玻璃培養(yǎng)瓶的消毒:1)高壓蒸汽滅菌15分鐘以上;2)干烤消毒140度2小時以上;2.無菌工作臺先清洗后用75%酒精擦拭干凈，紫外線照射40分鐘以上;各種培養(yǎng)板照射3小時以上;3.培養(yǎng)基(pH7.2)和血清配制好后要做無菌試驗:將血清按10%加入培養(yǎng)基內(nèi)，用無菌的玻璃離心管或玻璃瓶取*培養(yǎng)基5-10ml置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2-3天，肉眼見無渾濁或沉淀等異物。分裝后置4度保存;4.消化液(pH7.8)或其它加入液，應用高壓蒸汽滅菌或一次性無菌濾器過濾除菌，分裝成

轉(zhuǎn)化細胞免疫其作用機制2017/06/08

（1）轉(zhuǎn)化細胞致敏T細胞的直接殺傷作用。當致敏T細胞與帶有相應抗原的靶細胞再次接觸時，兩者發(fā)生特異性結合，產(chǎn)生刺激作用，使靶細胞膜通透性發(fā)生改變，引起靶細胞內(nèi)滲透壓改變，靶細胞腫脹、溶解以致死亡。致敏T細胞在殺傷靶細胞過程中，本身未受傷害，可重新攻擊其他靶細胞。參與這種作用的致敏T細胞，稱為殺傷T細胞。（2）通過淋巴因子相互配合、協(xié)同殺傷靶細胞。如皮膚反應因子可使血管通透性增高，使吞噬細胞易于從血管內(nèi)游出；巨噬細胞趨化因子可招引相應的免疫細胞向抗原所在部位集中，以利于對抗原進行吞噬、殺傷、清除等

人正常組織來源細胞培養(yǎng)常用器皿分析2017/06/06

人正常組織來源細胞培養(yǎng)以玻璃器皿為主，常準備zui需使用量的三倍。器皿應選擇透明度好、無毒、中性硬度玻璃制品。常用的玻璃器皿有下面幾種。(1)液體儲存瓶：用于儲存各種配制好的培養(yǎng)液、血清等液體，常以500ml、250ml、100ml生理鹽水瓶或血漿瓶代替。(2)培養(yǎng)瓶：根據(jù)培養(yǎng)細胞種類要求不同培養(yǎng)瓶的形態(tài)各異，用于細胞傳代培養(yǎng)的細胞要求瓶壁厚簿均勻，便于細胞貼壁生長和觀察，瓶口要大小一致，口徑一般不小于1cm，允許吸管伸入瓶內(nèi)任何部位，規(guī)格有200ml、100ml、50ml、25ml、10ml等

分析造成細胞培養(yǎng)失敗的主要原因2017/06/01

（一）人正常組織來源細胞物理消毒法1.紫外線消毒:紫外線是一種低能量的電磁輻射，可殺死多種微生物。革蘭陰性菌zui為敏感，其次是陽性菌，再次為芽孢，真菌孢子的抵抗力zui強。紫外線的直接作用是通過破壞微生物的核酸及蛋白質(zhì)等而使其滅活，間接作用是通過紫外線照射產(chǎn)生的臭氧殺死微生物。直接照射培養(yǎng)室消毒，用法簡單，效果好。紫外燈的消毒效果同紫外燈的輻射強度和照射劑量呈正相關，輻射強度隨燈距離增加而降低，照射劑量和照射時間呈正比。因此紫外燈同被照射物的距離和照射時間要適合。離地面2米的30W燈可照射9平

人正常組織來源細胞培養(yǎng)的溫度控制技巧2017/05/25

維持培養(yǎng)人正常組織來源細胞旺盛生長,必須有恒定而適宜的溫度。不同種類的細胞對培養(yǎng)溫度要求也不同。人體細胞培養(yǎng)的標準溫度為36.5℃±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡。培養(yǎng)細胞對低溫的耐受力較對高溫強，溫度上升不超過39℃時，人正常組織來源細胞代謝與溫度成正比；人體細胞在39-40℃1小時，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復；在40-41℃1小時，細胞會普遍受到損傷，僅小半數(shù)有可能恢復；41-42℃1小時,細胞受到嚴重損傷,大部分細胞死亡，個別細胞仍有恢復可相反，溫度不

轉(zhuǎn)化細胞培養(yǎng)器械的清洗操作步驟2017/05/23

1.轉(zhuǎn)化細胞清洗(1)玻璃器皿的清洗步驟：按浸泡→刷洗→浸酸→沖洗等四步程序進行。①浸泡：新購進的玻璃器皿常帶有灰塵，呈弱堿性，或帶有鉛、碑等有害物質(zhì)，故先用自來水浸泡過夜、水洗，然后再用2%~5%鹽酸浸泡過夜或煮沸30min，水洗。要領：培養(yǎng)用后的玻璃器皿要立即泡入清水中，使下道刷洗工作能順利進行。用后的玻璃器皿常帶有大量的蛋白質(zhì)附著，干涸后不易刷洗掉，用后要立即用清水浸泡。②刷洗：用軟毛刷、洗滌劑，刷去器皿上的雜質(zhì)，沖洗晾干。要領：浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗滌劑去器皿上的雜質(zhì)、刷洗次太多，會

干粉細胞培養(yǎng)基的配制方式及注意事項2017/05/18

在干細胞培養(yǎng)基配制過程中，不同的培養(yǎng)基其溶解性可能有一定的差別，培養(yǎng)基配制過程中血清、碳酸氫鈉及抗生素等的添加時間和用量、pH和滲透壓的測定及酸堿度是否需要調(diào)節(jié)等，都可能影響zui終細胞培養(yǎng)基性能的發(fā)揮。（1）配制常規(guī)過濾除菌粉末細胞培養(yǎng)基1)配制用水：通常選擇制備的超純水器過濾出的去熱原（細菌內(nèi)毒素2)培養(yǎng)基粉劑的稱量：小量采用天平稱量，要求準確；大量采用市售大包裝，配制時可以根據(jù)說明；3)干細胞粉劑溶解：溶解充分，觀察有無顆粒，顏色改變情況等；4)過濾前約半個小時（根據(jù)配制量可調(diào)）按使用說明

制備骨髓細胞染色體標本操作步驟2017/05/09

（一）轉(zhuǎn)化細胞短期培養(yǎng)法1．取材、培養(yǎng)：從髂骨取骨髓液0.2—0.5ml，無菌注入裝有5ml培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中，37℃培養(yǎng)23—25小時后，加入秋水仙堿（終濃度為0.07μg/ml），繼續(xù)培養(yǎng)3—4小時，收獲。2．染色體制片：低滲、固定、制片及染色同實驗一。（二）直接制備法1．從髂骨抽取0.3—0.5ml，立即注入濃度為0.07μg/ml的秋水仙堿的生理鹽水5ml中，以吸管輕輕吸動，將骨髓中脂肪顆粒充分吸掉，1000rpm離心8分鐘，棄上清。2．加入同樣濃度的秋水仙堿生理鹽水2—3ml，室溫放置2

人正常組織來源細胞供應商的選擇2017/05/04

選擇人正常組織來源細胞培養(yǎng)基的同時也需考核、選擇供應商。目前，國內(nèi)細胞培養(yǎng)基行業(yè)管理存在缺失現(xiàn)象，國內(nèi)細胞培養(yǎng)基行業(yè)沒有統(tǒng)一的質(zhì)量管理規(guī)范。生物制品企業(yè)除自身建立一套質(zhì)量檢驗體系外，挑選合格的細胞培養(yǎng)基供應商是進行原材料質(zhì)量控制的另一種重要的方法。選擇供應商時可通過對比細胞培養(yǎng)基企業(yè)在硬件和軟件上的情況和差距，對細胞培養(yǎng)基的原材料、過程、環(huán)境、用設備、應用性檢測、安全性檢測等方面檢查并評估供應商的、質(zhì)控能力。國產(chǎn)與進口人正常組織來源細胞培養(yǎng)基的及銷售渠道可能會有一定差別，進口產(chǎn)品供貨周期有一定限

制備單克隆抗體的方法2017/04/27

干細胞制備單克隆抗體的方法是用缺乏次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)化酶或胸腺嘧啶核苷酸酶的瘤細胞變異株與脾臟的B細胞融合。采用HAT選擇性培養(yǎng)基（培養(yǎng)基中加次黃嘌呤HyPoxanthineH，氨基喋呤AminoopterinA及胸腺嘧啶核苷ThymidineT），在這種選擇性培養(yǎng)基中，由于變異的瘤細胞不具有次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)化酶或胸腺嘧啶核苷激酶，所以不能利用培養(yǎng)基中的次黃嘌呤或胸腺嘧啶核苷而合成DNA。而只能利用谷酰胺與尿核苷酸單磷酸合成DNA，這一途徑又被氨基喋呤所阻斷，所以未融合的瘤細胞不可避免也要死亡

人正常組織來源細胞培養(yǎng)中污染特點分析2017/04/25

人正常組織來源細胞細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據(jù)感染細菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。支原體：黑色的，好象多為多形，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁，原體感染，國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。黑膠蟲：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會太影響，細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態(tài)良好，且觀測到的運動物無明

冷凍保存細胞的解凍與復蘇要點2017/04/20

腫瘤細胞冷凍保存細胞的解凍與復蘇要點：慢凍快融（1）快速解凍。凍存細胞從液氮中取出后，應立即放入37℃水浴中，輕輕搖動冷凍管，使其在1分鐘內(nèi)全部融化（不要超過3分鐘）。（2）解凍操作過程動作要輕。由于冷凍保存過的細胞變得非常脆弱，不僅解凍速度要快，而且動作要輕。一般情況下，解凍后的細胞可直接接種到含*生長培養(yǎng)液的細胞培養(yǎng)瓶中直接進行培養(yǎng)（1ml凍存細胞液加入到25－30ml新鮮*培養(yǎng)液中），24小時后再用新鮮*培養(yǎng)替換舊培養(yǎng)液，以去除DMSO。如果，細胞對冷凍保護劑特別敏感，那么，解凍后的細胞應